常规HE染色步骤.doc

常规HE染色步骤
（1）二甲苯（Ⅰ）5-10min
(2)二甲苯（Ⅱ）5-10min
(3)95%乙醇（Ⅰ）1-3min
（4）95%乙醇（Ⅱ）1-3min
（5）80%乙醇1min
（6）蒸馏水1min
（7）苏木精液染色5-15min
(8)流水稍洗去苏木精液1-3s
(9)1%盐酸乙醇1-3s
(10)稍水洗10-30s
(11)促蓝液返蓝10-30s
(12)流水冲洗10-15min
（13）蒸馏水过洗1-2s
(14)0.5%曙红液染色1-3min
(15)蒸馏水稍洗1-2s
(16)80%乙醇稍洗1-2s
(17)95%乙醇（Ⅰ）2-3s
(18)95%乙醇（Ⅱ）3-5s
(19)无水乙醇5-10min
(20)石炭酸二甲苯5-10min
(21)二甲苯（Ⅰ）2min
(22)二甲苯（Ⅱ）2min
(23)二甲苯（Ⅲ）2min
(24)中性树胶封固
注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。
②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤：
（1）冰冻切片固定10～30s
（2）稍水洗1～2s
（3）苏木精液染色（60℃）30～60s
（4）流水洗去苏木精液5～10s
（5）1%盐酸乙醇1～3s
（6）稍水洗1～2s
（7）促蓝液返蓝5～10s
（8）流水冲洗15～30s
（9）0.5%曙红液染色30～60s
（10）蒸馏水稍洗1～2s
（11）80%乙醇1～2s
（12）95%乙醇1～2s
（13）无水乙醇1～2s
（14）石炭酸二甲苯2～3s
（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s
（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s
（17）中性树胶封固。
注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。
染色结果：细胞核蓝色、胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4．12切片脱水透明切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖，。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。