石蜡切片制备基本步骤(附HE染色步骤).doc

石蜡切片制备基本步骤

一、准备工作
（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）
1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷
2、将器皿在自来水下冲洗干净
3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干
注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。
（二）配制：硫酸洗液的配制
清洁液（洗液）的配制：
成分强酸液次强酸液弱酸液
浓硫酸（ml）1000200100
重铬酸钾（mg）63120100
蒸馏水（ml）2002001000

重铬酸钾1200g
蒸馏水2000ml
将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌
（三）载玻片与盖玻片的处理
1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时
2.流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍
3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用
注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制
（一）缓冲溶液：
1．磷酸盐缓冲液
A液：0.1mol/L磷酸二氢钠
B液：0.1mol/L磷酸氢二钠
A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）
2．枸椽酸缓冲溶液
A液：0.1mol/L枸椽酸
B液：0.1mol/L枸椽酸钠
A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）
（二）固定剂：
1．甲醛：10%甲醛
福尔马林100ml
蒸馏水900ml
注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。
2．10％中性福尔马林钙固定液
甲醛液10ml
蒸馏水90ml
加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
3．4%多聚甲醛：
8%多聚甲醛
多聚甲醛8g
蒸馏水100ml
加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1NNaOH，并不停搅动至液体清明。
1NNaOH
lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量
氧化钠(NaOH)；分子量＝40．005，当量价＝1
1NNa0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中
4%多聚甲醛
8%多聚甲醛50ml
0.1M磷酸盐缓冲液50ml
PH7.2
先取50ml8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2
4．Bouin液：
苦味酸饱和水溶液75ml
36％~40％福尔马林液25ml
冰醋酸5m1
5．改良Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液45ml
95%酒精45ml
36％~40％福尔马林液5ml
冰醋酸5m1
6．Carnoy液：
冰醋酸10m1
氯仿30m1
无水乙醇60m1
以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。
（三）染色液
1．Harris苏木精液
A液：
苏木精1g
无水酒精10ml
B液：
铵矾或钾矾20g
蒸馏水200ml
氧化汞0.5ml
冰醋酸8ml
将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96ml中加4ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。
2．Mayer苏木精掖
苏木精1g
钾矾或铵矾50g
碘酸钠0.2g
蒸馏水1000ml
水合氯醛50g
枸橼酸1g
将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。
3．Hasnsen甲矾苏木精的配制
A液：苏木精1g
无水乙醇10ml
B液：钾矾20g
蒸馏水200ml
C液：高锰酸钾1g
蒸馏水16ml
三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。
4．伊红
0.5~1%水溶液或酒精溶液。
1．水溶性伊红
伊红5~10g
蒸馏水1000ml
冰醋酸10滴
先将水溶性伊红加