非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

山东农业科学２０２３ꎬ５５(１０):１４０~１４５ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.１０.０１９非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定矫健１ꎬ２ꎬ李建达２∗ꎬ韩先杰１ꎬ张琳２ꎬ张玉玉２ꎬ任素芳２ꎬ刘飞２ꎬ陈智２ꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎｋｏ２ꎬ张文娟３ꎬ于江１ꎬ２ꎬ吴家强１ꎬ２(１.青岛农业大学动物医学院ꎬ山东青岛２６６１０９ꎻ２.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室ꎬ山东济南２５０１００ꎻ３.山东碧蓝生物科技有限公司ꎬ山东泰安２７１４００)摘要:非洲猪瘟(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒꎬＡＳＦ)是由非洲猪瘟病毒(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓꎬＡＳＦＶ)引起的一种高度传染性病毒性疾病ꎬ发病率和死亡率高达１００％ꎬ对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击ꎮｐ２２蛋白为ＡＳＦＶ的结构蛋白ꎬ本研究构建了重组原核表达质粒ｐＥＴ－３２ａ－ｐ２２ꎬ将其转化至大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞表达重组ｐ２２蛋白并纯化ꎬ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定证实重组ｐ２２蛋白与ＡＳＦＶ阳性血清有良好的免疫反应性ꎮ利用重组ｐ２２蛋白免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠并通过间接ＥＬＩＳＡ方法筛选到２株能够稳定分泌ｐ２２蛋白单克隆抗体(ＭＡｂ)的杂交瘤细胞株２Ｄ６和５Ｅ７ꎮ经抗体亚型鉴定两株抗体均为ＩｇＧ１型ꎻ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ꎬ两株抗体能够特异性识别过表达的ｐ２２蛋白ꎮ综上ꎬ本研究成功表达并纯化了ｐ２２重组蛋白ꎬ制备了ｐ２２单克隆抗体ꎬ为进一步探讨ｐ２２蛋白的结构功能及其在ＡＳＦＶ中的感染致病机制提供了基础条件ꎮ关键词:非洲猪瘟病毒ꎻｐ２２蛋白ꎻ单克隆抗体ꎻ原核表达中图分类号:Ｓ８５２.６５＋１文献标识号:Ａ文章编号:１００１－４９４２(２０２３)１０－０１４０－０６ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｐ２２ＰｒｏｔｅｉｎｏｆＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒＶｉｒｕｓＪｉａｏＪｉａｎ１ꎬ２ꎬＬｉＪｉａｎｄａ２∗ꎬＨａｎＸｉａｎｊｉｅ１ꎬＺｈａｎｇＬｉｎ２ꎬＺｈａｎｇＹｕｙｕ２ꎬＲｅｎＳｕｆａｎｇ２ꎬＬｉｕＦｅｉ２ꎬＣｈｅｎＺｈｉ２ꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎｋｏ２ꎬＺｈａｎｇＷｅｎｊｕａｎ３ꎬＹｕＪｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＷｕＪｉａｑｉａｎｇ１ꎬ２(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔꎬｙＱｉｎｇｄａｏ２６６１０９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ/ＳｈａｎｄｏｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ/ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＬｉｖｅｓｔｏｃｋａｎｄＰｏｕｌｔｒｙＭｕｌｔｉ￣ｏｍｉｃｓꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＲｕｒａｌＡｆｆａｉｒｓꎬＪｉｎａｎ２５０１００ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＳｈａｎｄｏｎｇＧｒｅｅｎＢｌｕｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙＬｉｍｉｔｅｄꎬＴａｉａｎ２７１４００ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ(ＡＳＦ)ｉｓａｈｉｇｈｌｙｃｏｎｔａｇｉｏｕｓｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅｃａｕｓｅｄｂｙＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ(ＡＳＦＶ)ｗｉｔｈｔｈｅｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｕｐｔｏ１００％ꎬｗｈｉｃｈｈａｓｃａｕｓｅｄａｄｅｖａｓｔａｔｉｎｇｂｌｏｗｔｏＣｈｉｎａ’ｓｐｉｇｆａｒｍｉｎｇｉｎｄｕｓｔｒｙ.Ｔｈｅｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｉｓａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｏｆＡＳＦＶ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐＥＴ￣３２ａ￣ｐ２２ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１(ＤＥ３)ｒｅｃｅｐｔｉｖｅ收稿日期:２０２２－１２－２８基金项目:山东省重点研发计划项目(２０２０ＣＸＧＣ０１０８０１ꎬ２０２２ＴＺＸＤ００４１ꎬ２０２２ＣＸＰＴ０１０ꎬ２０２１ＬＺＧＣ００１)ꎻ山东省现代农业产业技术体系(ＳＤＡＩＴ－０８－０１)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程项目(ＣＸＧＣ２０２３Ｆ１０ꎬＣＸＧＣ２０２３Ａ２１ꎬＣＸＧＣ２０２３Ａ２１)ꎬ泰山学者工程项目作者简介:矫健(１９９８—)ꎬ男ꎬ山东青岛人ꎬ硕