非洲猪瘟病毒D117L编码蛋白的CHO细胞表达、单克隆抗体制备、表位鉴定及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115819519A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211084431.1G01N33/577(2006.01)(22)申请日2022.09.06(71)申请人中国农业科学院上海兽医研究所地址201100上海市闵行区紫月路518号(72)发明人高飞李丽薇乔思娜刘佳晨童光志周艳君童武姜一峰王安冉(74)专利代理机构北京市诚辉律师事务所11430专利代理师范盈(51)Int.Cl.C07K14/01(2006.01)C07K16/08(2006.01)C12N15/85(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称非洲猪瘟病毒D117L编码蛋白的CHO细胞表达、单克隆抗体制备、表位鉴定及应用(57)摘要本发明涉及一株针对ASFVD117L编码蛋白的CHO细胞表达、单克隆抗体制备、表位鉴定及应用。通过构建真核表达载体pCDNA3.4‑D117L‑strep,瞬时转染CHO细胞表达重组p17蛋白，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗p17蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为8LLSHNLSTREGIK20。CN115819519ACN115819519A权利要求书1/1页1.一种猪ASFVD117L编码蛋白的抗原表位，所述抗原表位可以特异性识别猪源ASFVp17蛋白。2.如权利要求1所述的一种猪ASFVp17蛋白的抗原表位，所述抗原表位为猪源p17蛋白8－20肽段，其氨基酸序列为(8LLSHNLSTREGIK20)，可用于IFA实验中ASFVp17蛋白和Westernblotting实验中还原状态下p17蛋白的检测。3.一种抗体制剂，所述抗体制剂包含特异性针对权利要求1或2中所述的ASFVp17蛋白的抗原表位的抗体，所述抗体是单克隆的；或所述制剂包含所述抗体的片段。4.权利要求3所述的抗体制剂，所述抗体制剂可以有效的诊断或检测ASFV。5.两种制备抗血清的方法，所述方法包括将权利要求1或2中所述的抗原表位给药至动物宿主以在所述动物宿主中产生抗体和回收包含在所述动物宿主中产生的抗体的抗血清。6.一种抗原组合物，所述抗原组合物包含至少一种抗原，其中所述至少一种抗原包含ASFVp17蛋白的至少部分蛋白或多肽且所述至少部分蛋白或多肽包含至少一种猪ASFVp17蛋白的抗原表位或抗原决定簇。7.如权利要求6所述的抗原组合物，所述的猪ASFVp17蛋白的抗原表位为猪ASFVp17蛋白8－20肽段，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示(8LLSHNLSTREGIK20)。8.权利要求1或2所述的一种猪ASFVp17蛋白的抗原表位、权利要求3或4所述的抗体制剂、权利要求6、7所述的抗原组合物在制备诊断或检测ASFV的ELISA抗体检测试剂盒中的应用。2CN115819519A说明书1/9页非洲猪瘟病毒D117L编码蛋白的CHO细胞表达、单克隆抗体制备、表位鉴定及应用技术领域[0001]本发明涉及生物学领域，具体提供了一种猪非洲猪瘟病毒D117L编码蛋白的CHO细胞表达、单克隆抗体制备、表位鉴定及应用。背景技术[0002]非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的急性、热性、高度接触传染性疾病，常跨境传播。该病于1921年被首次报道，在撒哈拉以南非洲地区流行。2007年，该病在格鲁吉亚暴发，随后迅速蔓延至俄罗斯。2014年，该病传入东欧大部分国家，并显示出扩大流行趋势。世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病。我国将其列为重点防范的一类动物传染病。目前，没有商业化疫苗用于防控该病。2018年8月3日，我国首例病例在沈阳被报道，至今该病给我国养猪业带来了惨重损失。[0003]ASFV是一种有囊膜、二十面体结构的DNA病毒，不同毒株基因组大小略有差异，约为170‑190kb，包含至少150个开放阅读框，编码至少200种病毒蛋白。其中，与病毒复制、免疫逃逸、致病传播相关的蛋白被重点关注，包括p12(O61R)、p17(D117L)、p30(CP204L)、p54(E183L)和p72(B646L)等。ASFVD117L编码序列在毒株之间高度保守，其编码的内囊膜蛋白p17，在病毒包装形成二十面体的步骤中发挥至关重要的作用，可以亲和细胞内质网，参与病毒颗粒形成。当p17表达受阻时，可以显著抑制病毒pp220和pp62水解，影响病毒颗粒形成与组装。[0004]ASFVD117L编码蛋白的前期功