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基因工程的基本程序一、目的基因的获取3)基因组DNA文库与cDNA文库依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的A、染色体DNAB、线粒体DNAC、总mRNAD、tRNA2、利用PCR技术扩增目的基因PCR——聚合酶链式反应是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）前提：原料PCR技术的操作过程PCR技术扩增与DNA复制的比较反转录法3、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是①双链DNA分子为模板②ATGTG或TACAC模板链③四种脱氧核苷酸④四种核苷酸⑤DNA聚合酶⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物⑧温度变化⑨恒温A．①③④⑦⑨B．①④⑥⑦⑧C．②⑤⑥⑦⑨D．①③⑥⑦⑧4、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是A.540个B.8100个C.17280个D.7560个所以，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸数为DNA在高温下变性解旋抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。C．基因探针技术可用于疾病诊断和环境监测所以，一个目的基因有胞嘧啶脱氧核苷酸540个。都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的（1）农杆菌转化法用目的基因作为基因探针，与待测DNA混合，若出现杂交带，说明二者互补。DNA在高温下变性解旋是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体细菌的群体中储存，这个群体就称为该生物的基因组文库。为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号。第二步：将表达出的蛋白质（相当于抗原）注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体；制原则，其中有一个DNA分子“相当”于亲代的DNA。抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。如大肠杆菌经CaCl2处理，成为容易受质粒DNA转化的细胞。抗体的结合显示不出条带PCR技术扩增与DNA复制的比较二、基因表达载体的构建——基因工程的核心2、基因表达载体的组成：启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。基因表达载体除含有目的基因外，还需要以下元件：已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。基因表达载体除含有目的基因外，还需要以下元件：三.将目的基因导入受体细胞1、将目的基因导入植物细胞的方法：③过程：原理：农杆菌转化法中有二次拼接和二次导入。第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒上TDNA的中间部位，第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上；第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的TDNA进入受体细胞。因为动物体细胞的全能性受到一定限制，故一般将目的基因导入动物的受精卵或卵细胞，而不是体细胞；而植物体细胞的全能性相对容易表达，故一般将目的基因导入植物的体细胞，然后再通过植物组织培养技术获得转基因植株。（2）基因枪法:2、将目的基因导入动物细胞①方法：显微注射法②程序：3、将目的基因导入微生物细胞①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少②方法：四、目的基因的检测与鉴定外显子：能编码蛋白质的序列答案：（1）aa（2）基因枪法（花粉管通道法）以_____方式扩增，第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一基因工程基本操作的四个步骤第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；2、基因表达载体的组成：A．①②③④B．①②③抗）与目的基因表