基因工程的基本操作程序(1)优品文档.ppt

基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序为什么要有“目的基因的获取”这一步？真核细胞的基因结构目的基因主要是______________________，也可以是一些具有调控作用的因子1）从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类3、基因文库的构建基因组DNA文库真核生物转录过程文库类型村长,为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物中提取不行吗？？？1、概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。四种脱氧核苷酸(dNTP)PCR扩增仪如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取在热作用下，断裂，形成_______部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，（4）为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等；如：cDNA文库终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录。有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板B．有利于对目的基因是否导入进行检测如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类PCR仪一次性吸液枪头利用PCR技术扩增目的基因通过DNA合成仪用化学方法人工合成为什么要有“表达载体的构建”这一步？基因表达载体的组成：启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。方法农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上基因枪法花粉管通道法显微注射法2.微生物作受体细胞原因：不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。基因工程的基本操作程序思考：1.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？③从受体细胞中提取④利用PCR技术①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。2）利用PCR技术扩增目的基因C．质粒都可作为运载体如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。基因DNA的核苷酸序列一小段单链DNA或RNA，一般20～30个碱基，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。四种脱氧核苷酸(dNTP)利用PCR技术扩增目的基因繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少但是，有时我们完全不知道目的基因序列，或者想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道几种生物之间有哪些基因不同，或者想知道一种生物在不同的发育阶段都表达哪些基因，或者想得到一种生物的全部基因序列，往往就需要构建基因文库。未知目的基因的核苷酸序列基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类——感受态细胞吸收DNA分子2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做?3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。（2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。（3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。（4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。1.下表关于基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性B．有利于对目的基因是否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接4.有关基因工程的叙述正确的是A．限制酶只在获得目的基