基因工程的基本操作程序.优品文档.ppt

基因工程的基本操作程序.仅限于合成核苷酸对较少的简单基因使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库.用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。仅限于合成核苷酸对较少的简单基因2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。鸟枪法（散弹射击法）B、有多个限制酶切点根据已知的氨基酸序列合成DNA步骤四：目的基因的检测与鉴定前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。用限制酶切断成许多片段单链DNA(cDNA)步骤一：目的基因的获取这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。（3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。仅限于合成核苷酸对较少的简单基因这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。（2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。C、具有标记基因目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：1）DNA序列自动测序仪：根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。1.鸟枪法（散弹射击法）用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。1）反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？3）从基因文库中获取目的基因：用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其他载体上，再将它们转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到可以包括某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。这一定义也适用于线粒体DNA和叶绿体DNA，分别称为某种生物的线粒体基因文库或叶绿体基因文库。为了有效地保存基因文库，可通过细菌在固体培养基上繁殖而使包含各个特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的方法，可以筛选出包含有所需基因的DNA片段的细菌（或噬菌体）。经过扩增得到大量这样的细菌（或噬菌体），从中便可分离出所需基因的DNA片段。建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。步骤二：基因表达载体的构建①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。（2）显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。（3）直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。（4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。②间接导入法常用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。（2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。（3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。1.将目的基因导入植物细胞2.将目的基因导入动物细胞3.将目的基因导入微生物细胞步骤四：目的基因的检测与鉴定不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因