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基因工程常规技术核酸提取纯化第4章基因工程常规技术由于提取DNA的目的、种类、所用的生物、组织材料、实验条件等不同，DNA的提纯有很多方法。其中最常用的是碱抽提法plasmidDNA大肠杆菌基因组DNA闭合环状的质粒DNA，在变性后不会分离，复性快。染色体线性DNA或有缺口的质粒DNA变性后双链分离，难以复性而形成缠绕的结构，与蛋白质—SDS复合物结合在一起，在离心的时候沉淀下去。天根生化质粒提取试剂盒提取流程用苯酚和酚-氯仿抽提除去蛋白质污染。无poly(A)mRNA的分离因此这些噬菌体就不能够整合到细菌基因组中，并且只能够通过细菌溶解循环来侵染细胞。用微量比色杯（10l）在紫外分光光度计直接测定。当这样的培养物被离心时，细菌聚集成小球沉淀在离心管的底部，把噬菌体颗粒留在了悬液中,噬菌体颗粒接着被从悬液中收集起来。碱抽提法提取质粒DNA的步骤RNA进样吸附洗涤洗脱收集260nm处吸收峰样品乙醇沉淀4-5mg/ml溶菌酶，冰醋酸把醋酸钾溶液的pH调到4.得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、转化转染等分子生物学下游实验。（现多用各种商品化的层析柱纯化DNA)。③EDTA冰醋酸把醋酸钾溶液的pH调到4.8。用来中和NaOH变性液，使DNA复性。⑦RNaseA蛋白变性剂，进一步抽提DNA溶液中的蛋白质，使蛋白质沉淀。但苯酚会残留在DNA溶液中。（现多用各种商品化的层析柱纯化DNA)。碱抽提法提取质粒DNA的步骤溶液II破坏细胞膜，蛋白质和DNA变性。上清液中含有闭合质粒DNA。2.使用试剂盒提取质粒DNA原理：在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上，然后用低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、转化转染等分子生物学下游实验。天根生化质粒提取试剂盒提取流程最重要的是：这是直接决定DNA产量的重要因素之一。若干常用质粒的理论产量一般过程及原理：（2）DNA纯化一般过程及原理：0.5%SDS和0.1mg/ml蛋白酶K。50oC温育。一般过程及原理：用0.6倍体积的异丙醇三、噬菌体DNA的提取5MNaCl140ml；乙醇沉淀浓缩制得DNA。低聚dT纤维素:用于poly(A)较长的mRNA；分子量大的质粒，拷贝数少。独特配方--RNAplant植物RNA提取试剂溶源性λ噬菌体的制备：质粒本身的性质所决定。原理：能沉淀出蛋白质但仍保留核酸(DNA和RNA)在水溶液中。DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。加入苯酚;一般使用琼脂糖凝胶电泳，与已知分子量的DNA标准混合液对比得知。使用核糖核酸酶，它能够迅速降解RNA分子，把它们变成单核苷酸最有效的除去RNA的方法：高浓度的NaAc有利于变性的大分子（蛋白质、DNA、RNA等）沉淀。由于提取DNA的目的、种类、所用的生物、组织材料、实验条件等不同，DNA的提纯有很多方法。大肠杆菌基因组DNA（6）除去蛋白质1.紫外光谱法溴化乙锭（EB）能插入DNA分子中，紫外光照射下能发红色荧光。一般使用琼脂糖凝胶电泳，与已知分子量的DNA标准混合液对比得知。DNAladder总RNA的提取与纯化RNA提取注意事项RNA提取注意事项总RNA的提取与纯化样品前处理细胞裂解释放RNARNA的纯化及获得mRNA的分离RNA质量检测感谢观看