基因工程制药完整PPT.ppt

基因工程制药2.1概述2.1.1利用基因工程技术生产内源生理活性物质2.1.2基因工程药物种类2.1.3利用基因工程生产药品优点2.1.4我国基因工程药物研发现状2.2基因工程药物生产过程2.3目的基因获得对已发现基因改造2.4基因表达2.4.1宿主应满足条件2.4.2宿主分类大肠杆菌枯草芽孢杆菌链霉菌酵母丝状真菌当前研究重点2.4.3大肠杆菌表达载体的要求影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素如何提高表达产物的稳定性细胞代谢负荷如何减轻细胞代谢负荷真核基因在大肠杆菌中表达的形式2.4.4酵母体系中的基因表达载体影响目的基因在酵母中表达的因素2.5基因工程菌生长代谢特点菌体生长与能量关系菌体生长和前体供应关系质粒对菌体生长的影响严谨反应2.6基因工程菌的不稳定性2.6.1质粒的不稳定性产生分裂不稳定因素产生结构不稳定因素质粒不稳定性分析方法提高质粒稳定性方法（一）提高质粒稳定性方法（二）2.7基因工程菌中试2.7.1工程菌选择2.7.2反应器（发酵罐）设计2.7.3发酵培养基组成2.7.4工艺最佳化与参数检测控制2.7.5计算机的应用2.8重组工程菌的培养2.8.1基因工程菌的培养方式分批培养控制方法2.8.2基因工程菌培养工艺培养基接种量温度溶解氧诱导时机的影响诱导表达程序的影响pH工程菌发酵最佳化工艺2.8.3基因工程菌培养设备发酵罐发酵罐要求理想发酵罐应当满足如下要求：2.9高密度发酵高密度发酵优点2.9.1影响高密度发酵的因素培养基是指最快周期、最高产量、最好质量、最低消耗、最大安全性、最周全的废物处理效果和最低失败率等综合指标。不致病、无毒性，能安全生产目的：提高基因表达产物的稳定性，提高体内半衰期、提高表达产物生物学活性、降低有效使用剂量或提高表达量、降低毒性和免疫原性限制进入糖酵解途径的碳代谢流中试可以得到大量产品供临床实验，也可将中试所得数据供生产设计时参考。分子伴侣或折叠酶促进的复性4工艺最佳化与参数检测控制控制菌体比生长速率方法：1）通过调节葡萄糖流加速率以控制溶氧在20％；免疫球蛋白：抗原和单克隆抗体容易进行重组DNA技术容易进行重组DNA技术单独考虑营养源、溶氧浓度、pH、温度等是不够的，需要对它们进行综合考虑。pH温度代谢副产物2.9.2实现高密度发酵的方法发酵条件的改进小结构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌2.10基因工程药物的分离纯化2.11变性蛋白的复性2.11.1包含体形成原因2.11.2包涵体的分离和溶解2.11.3包涵蛋白复性方法2.12基因工程药物的质量控制2.12.1医药生物技术产品质量保证的一般技术要点2.12.2生物材料的质量控制2.12.3培养过程的质量控制2.12.4纯化过程的质量控制2.12.5目标产品质量控制生物活性测定理化性质鉴定提高质粒稳定性方法（一）2）重组菌在复合培养基中稳定性较高，且需要保持较高的溶氧，通过间歇供氧和改变稀释率可提高质粒稳定性。6基因工程菌的不稳定性2）生物量：浑浊度、细胞组分、总氮量及菌丝干重；在基础培养基中添加氨基酸能使菌体比生长速率提高和蛋白质合成增加。维持较高的溶氧水平不仅利于菌体生长，而且有利于外源蛋白的表达。迄今，30余种基因工程药物投入市场，产生巨大经济和社会效益。重组蛋白免疫学活性可采用免疫分析法或酶标法测定影响目的基因在酵母中表达的因素不存在信号肽，产品多为胞内产物，提取时需将细胞破碎，造成提取困难措施1：细胞大量生长时抑制外源基因表达容易进行重组DNA技术用一般基因重组技术获得1997年生产得到α1b干扰素符合国家卫生部门有关规定体外生物学活性测定有：细胞计数法、3H-TαR掺入法和酶法细胞计数将工程菌培养液样品适当稀释，均匀涂布于不含抗性标记抗生素的平板培养基上，培养10－12h，然后随机挑选100个菌落接种到含抗性标记抗生素的平板培养基上，培养10－12h，统计长出的菌落数。1）葡萄糖（副产物多）和甘油（菌体得率高）为碳源比生长速率和呼吸强度相差不大，但葡萄糖对lac启动子又抑制作用；蛋白质纯度分析杂质检测感谢观看