基因制药基因工程制药完整PPT.ppt

基因制药基因工程制药第一节概述
第二节基因药物生产的基本过程
第三节目的基因的获得
第四节基因表达
第五节基因工程菌的稳定性
第六节基因工程菌发酵
第七节基因工程药物的分离纯化
第八节基因工程药物的质量控制第一节概述基因工程正在逐渐显示其在生物技术药物制备上的优势。
应用基因工程技术可十分方便且有效地解决上述提到的问题，从质和量上都可以得到改进，而且可以创造全新物质。
如今，癌症、病毒性疾病、心血管疾病以及内分泌等方面的预防、治疗和诊断已可通过基因工程技术获得。利用基因工程技术生产药品的优点：（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除。如白细胞介素-2的第125位半胱氨酸是游离的，有可能引起-S-S-键的错配而导致活性下降，如将此半胱氨酸改为丝氨酸或丙氨酸，白细胞介素-2的活性以及热稳定性均有提高；
（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。
基因工程技术可将不同种类和用途的基因，在原核细胞中表达的特性使其不仅在医药，而且在很多行业中都会有重要的应用。第二节基因工程药物生产的基本过程基因工程药物生产的上游和下游工程菌（或细胞）构建中重要的工具Cuttingbyenzymes下游阶段在产业化中是极其重要的第三节目的基因的获得克隆真核基因常用的方法逆转录酶及其催化特性克隆真核基因常用的方法
基因表达系统就是上述的工程菌或细胞，有原核生物和真核生物两类表达系统；
第二节基因工程药物生产的基本过程
下游：主要指的是从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。
cDNA片段与载体的连接
基因工程技术就是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。
下游阶段是将实验室成果产业化、商品化，主要包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立，新型生物反应器的研制，高效分离介质及装置的开发，分离纯化的优化控制，高纯度产品的制备技术，生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造，电子计算机的优化控制等。
在真核细胞中mRNA的3‘末端常常含有一多聚腺苷酸polyA组成的末端，长达20~250个腺苷酸，可采用OligodT-纤维素，以亲和层析法将mRNA从细胞总RNA中分离出来。
发夹结构结构切除后，双链cDNA分子的大小常用变性琼脂糖凝胶电泳进行测定。
核酸酶S1专一性切除单链DNA，因此用它可以切除发夹结构。
3、cDNA第二链的合成
6、cDNA文库的鉴定
（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。
同时为保证目的基因的正确性，对目的基因要进行限制性内切酶和核苷酸序列分析。
第三节目的基因的获得
coli或其它宿主菌（细胞）大量复制目的基因过程中的重要工具。
以上程序中的每个阶段都包含若干细致的步骤，这些程序和步骤将会随研究和生产条件的不同而改变。
下游：主要指的是从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。一、逆转录法
1、mRNA的纯化
2、cDNA第一链的合成
3、cDNA第二链的合成
4、cDNA克隆
5、将重组体导入宿主细胞
6、cDNA文库的鉴定
7、目的cDNA克隆的分离和鉴定181、mRNA的纯化2、cDNA第一链的合成RT-PCR

反转录PCR对于目的基因的获得需要根据目的基因的来源采取适当的方法。
基因工程技术就是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。
（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除。
7、目的cDNA克隆的分离和鉴定
另外，原核表达系统是有局限性的，主要是由于真核基因的内含子及基因的后翻译过程，所以真核系统得到了相应发展。
（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；
应用基因工程技术可十分方便且有效地解决上述提到的问题，从质和量上都可以得到改进，而且可以创造全新物质。
（1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；
6、cDNA文库的鉴定
工程菌的发酵工艺不同于传统的抗生素和氨基酸发酵，需要对影响目的基因表达的因素进行分析，对各种影响因素进行优化，建立适于目的基因高效表达的发酵工艺，同时建立一系列相应的分离纯化、质量控制、产品保存等技术。
在凝胶电泳后，进行放射自显影分析产物的分子大小，探索最佳反应条件。
核酸酶S1专一性切除单链DNA，因此用它可以切除发夹结构。4、cDNA克隆cDNA片段与载体的连接cDNA片段与载体的连接5、将重组体导入宿主细胞7、目的cDN