基因工程概论专家讲座.pptx

基因工程概论4目标基因克隆与基因文库构建A鸟枪法鸟枪法克隆目标基因基本战略鸟枪法克隆目标基因基本战略鸟枪法克隆目标基因基本战略鸟枪法操作改进鸟枪法操作改进鸟枪法操作改进鸟枪法克隆目标基因不足BcDNA法cDNA法克隆目标基因基本战略cDNA法克隆目标基因基本战略cDNA第二链合成DNApoldNTPsdCTPcDNA法克隆目标基因基本战略cDNA法分离目标基因基本程序cDNA法分离目标基因基本程序cDNA法分离目标基因基本程序差异分离程序cDNA法克隆目标基因不足CPCR法PCR技术诞生与发展使用PCR技术克隆目标基因前提条件是：已知待扩增目由TaqDNA聚合酶扩增PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为TaqDNA聚合酶对dATP含有优先聚合活性。因为该突出碱基存在，克隆时即能够采取TdT末端加同聚尾方法与载体拼接，也能够使用专门盒式PCR扩增法D化学合成法化学合成法基本战略全基因合成补钉延长法：大片段酶促法：上述三种方法各有利弊：化学合成DNA单片段愈短，收率就愈高，但因为化学合成份额较大，成本较高；在大片段酶促法合成目标基因时，即使化学合成份额相对较小，成本较低，但大片段化学合成收率极低，比如，每聚合一个单体产物收率为95%则合成50个碱基长DNA单链大片段总收率只有7.7%。化学合成单元操作E基因文库构建基因文库基本概念基因文库基本概念基因文库基本概念基因文库基本概念基因文库构建程序基因组DNA制备基因文库构建程序基因文库构建程序载体和受体选择基因文库构建程序基因文库构建程序基因文库构建程序基因组文库重组克隆排序基因组文库重组克隆排序基因组文库重组克隆排序染色体走读法