蛋白质的分离和纯化.pptx

蛋白质的分离和纯化一、蛋白质分离一、蛋白质分离二、常见分离方法1.离心沉降法2.薄膜透析法小分子杂质（无机盐、单糖、二糖及氨基酸等）从透析袋中出来，而蛋白质留在袋内。3.蛋白质分离方法：3.凝胶色谱法下列图中最早洗脱下来是什么？为何？蛋白质的分离和纯化分子量用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大蛋白质A．旅程较长，移动速度较慢B．旅程较长，移动速度较快C．旅程较短，移动速度较慢D．旅程较短，移动速度较快相对分子质量不一样蛋白质在凝胶中进行过程可表示为图中哪一个4.电泳醋酸纤维薄膜电泳琼脂糖凝胶电泳SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳：测定蛋白质相对分子质量。SDS能使蛋白质完全变性，SDS所带电荷大大超出了蛋白质原有电荷。迁移率取决于分子大小。使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不一样蛋白质电泳迁移率完全取决于A电荷多少B分子大小C肽链多少D分子形状差异三、血红蛋白提取和分离1.样品处理（2）血红蛋白释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。甲苯：溶解细胞膜，有利于血红蛋白释放和分离。蒸馏水作用：使红细胞吸水胀破分离血红蛋白溶液取1mL血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL物质量浓度为20mmol/L磷酸缓冲液（PH=7）中，透析12h。透析能够去除样品中分子量较小杂质，或用于更换样品缓冲液。【注】缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH影响而保持pH稳定。使用PH=7磷酸缓冲液，有利于维持血红蛋白正常特征。1、以下操作正确是（）A.分离红细胞时采取低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/l磷酸缓冲液，透析12h2、在蛋白质提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误是（）A洗涤红细胞目标是去除血浆中葡萄糖、无机盐B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离效果C洗涤过程选取0.1%生理盐水D透析目标是去除样品中相对分子质量较小杂质3.纯化--凝胶色谱法凝胶色谱柱装填样品加入与洗脱1、在装填凝胶柱时，不能有气泡存在原因()A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质洗脱次序，降低分离效果B、气泡妨碍蛋白质运动C、气泡与蛋白质发生化学反应D、气泡在装填凝胶时候，使凝胶不紧密2、样品加入和洗脱操作不正确是A加样前，打开色谱柱下端流出口，使柱内凝胶面上缓冲液迟缓下降到凝胶面下面B．加样后，打开下端出口，使样品渗透凝胶床内C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D．用吸管小心将1ml透析后样品加到色谱柱顶端，不要破坏凝胶面4.纯度判定---SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳