蛋白质的分离和纯化ppt课件.ppt

一、蛋白质的分离一、蛋白质的分离二、常用的分离方法1.离心沉降法2.薄膜透析法小分子杂质（无机盐、单糖、二糖及氨基酸等）从透析袋中出来，而蛋白质留在袋内。3.蛋白质分离的方法：3.凝胶色谱法下图中最早洗脱下来的是什么？为什么？.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质
A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快
C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个4.电泳醋酸纤维薄膜电泳
琼脂糖凝胶电泳
SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳：测定蛋白质相对分子质量。
SDS能使蛋白质完全变性，SDS所带电荷大大超过了蛋白质原有电荷。
迁移率取决于分子大小。使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于
A电荷的多少B分子的大小
C肽链的多少D分子形状的差异
三、血红蛋白的提取和分离1.样品处理（2）血红蛋白的释放
在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。
甲苯：溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。
蒸馏水作用：使红细胞吸水胀破分离血红蛋白溶液取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（PH=7）中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。
【注】缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的影响而保持pH稳定。
使用PH=7的磷酸缓冲液，有利于维持血红蛋白的正常特性。1、下列操作正确的是（）
A.分离红细胞时采用低速长时间离心
B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可
C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心
D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h2、在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是（）
A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐
B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果
C洗涤过程选用0.1%的生理盐水
D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质3.纯化--凝胶色谱法凝胶色谱柱的装填样品加入与洗脱1、在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因
()
A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果
B、气泡阻碍蛋白质的运动
C、气泡与蛋白质发生化学反应
D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密2、样品的加入和洗脱的操作不正确的是
A加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内
C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口
D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面4.纯度鉴定---SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳