细胞自噬与肿瘤专家讲座.pptx

细胞自噬与肿瘤一、自噬介绍二、自噬研究方法三、自噬与肿瘤关系一、自噬介绍自噬过程自噬发生过程分子机制自噬研究方法不过因为二者反抗体结合能力差异造成检测敏感性不一样(LC3-Ⅱ检测敏感性高于LC3-Ⅰ)，实际检测结果LC3-Ⅰ降低并不与LC3-Ⅱ增加同时，所以单纯比较LC3-Ⅱ蛋白水平可能更加好。3、基于自噬性降解检测———“自噬潮”分析自噬过程是动态改变，想要说明细胞自噬活性强弱，必须通观整个自噬过程是否顺利，即经过基于自噬性降解自噬潮分析来深入说明自噬活性。自噬潮涵盖了自噬体形成、自噬性底物向溶酶体运输以及在溶酶体内降解整个过程。显然，对这整个过程进行监测比单纯自噬体检测更能反应自噬活性，所以“自噬潮”分析是反应自噬活性可靠指标。3.1、长寿命蛋白降解依据自噬机制主要负责降解长寿命蛋白特征，先让细胞在含有同位素标识氨基酸培养基中生长一段时间，细胞在此期间合成蛋白质都将被同位素标识，然后换成不含同位素培养基，让一些被标识短寿命蛋白经过蛋白酶体路径降解。在自噬诱导后，经过检测培养基上清中释放自噬性降解产物放射性活度即可反应细胞自噬性降解能力。3.2、LC3和其它自噬性底物降解自噬过程中，自噬体内膜上LC3-Ⅱ被溶酶体降解，经过免疫印迹监测自噬过程中LC3蛋白量改变或流式细胞仪监测GFP-LC3荧光强度改变即可反应自噬活性。在自噬诱导一开始，GFP-LC3点状聚集显著增多，随即信号可能会出现下降，代表着自噬性降解发生。3.3、mRFP-GFP-LC3溶酶体呈递3.4、GFP-LC3切割LC3连同自噬体内膜和内容物一起被溶酶体降解，但GFP在溶酶体中仅表现荧光信号猝灭，GFP本身并不被降解，在自噬性溶酶体降解后会释放出游离GFP。经过免疫印迹方法检测游离GFP蛋白出现即意味着自噬性降解发生。自噬与肿瘤关系参考文件