细胞自噬与肿瘤.ppt

细胞自噬与肿瘤一、自噬简介二、自噬研究方法三、自噬与肿瘤的关系一、自噬简介自噬过程自噬发生过程的分子机制自噬的研究方法但是由于二者对抗体结合能力的差异导致检测敏感性的不同(LC3-Ⅱ检测敏感性高于LC3-Ⅰ)，实际检测结果LC3-Ⅰ的减少并不与LC3-Ⅱ的增加同步，因此单纯比较LC3-Ⅱ蛋白的水平可能更好。3、基于自噬性降解的检测———“自噬潮”
分析自噬过程是动态变化的，想要说明细胞自噬活性的强弱，必须通观整个自噬的过程是否顺利，即通过基于自噬性降解的自噬潮分析来进一步说明自噬活性。
自噬潮涵盖了自噬体的形成、自噬性底物向溶酶体的运送以及在溶酶体内降解的整个过程。显然，对这整个过程进行监测比单纯自噬体检测更能反映自噬活性，因此“自噬潮”分析是反映自噬活性的可靠指标。3.1、长寿命蛋白降解
根据自噬机制主要负责降解长寿命蛋白的特性，先让细胞在含有同位素标记氨基酸的培养基中生长一段时间，细胞在此期间合成的蛋白质都将被同位素标记，然后换成不含同位素的培养基，让一些被标记的短寿命蛋白通过蛋白酶体途径降解。
在自噬诱导后，通过检测培养基上清中释放的自噬性降解产物的放射性活度即可反映细胞自噬性降解的能力。3.2、LC3和其他自噬性底物的降解
自噬过程中，自噬体内膜上的LC3-Ⅱ被溶酶体降解，通过免疫印迹监测自噬过程中LC3蛋白量的变化或流式细胞仪监测GFP-LC3荧光强度的变化即可反映自噬活性。在自噬诱导一开始，GFP-LC3点状聚集显著增多，随后信号可能会出现下降，代表着自噬性降解的发生。
3.3、mRFP-GFP-LC3的溶酶体呈递3.4、GFP-LC3切割
LC3连同自噬体内膜和内容物一起被溶酶体降解，但GFP在溶酶体中仅表现荧光信号猝灭，GFP本身并不被降解，在自噬性溶酶体降解后会释放出游离的GFP。
通过免疫印迹的方法检测游离GFP蛋白的出现即意味着自噬性降解的发生。自噬与肿瘤的关系参考文献