一种高效表达重组丙型肝炎病毒多表位抗原的方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102286107A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102286107A(43)申请公布日2011.12.21(21)申请号201110195302.5(22)申请日2011.07.13(71)申请人天津迈迪瑞康生物医药科技有限公司地址300170天津市武清区杨村泉州北路18号A座101-9(72)发明人杨杰雷荣悦周强(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)A61K48/00(2006.01)A61K39/29(2006.01)A61P31/14(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表5页附图2页(54)发明名称一种高效表达重组丙型肝炎病毒多表位抗原的方法和应用(57)摘要本发明属于生物工程技术领域，涉及一种高效表达重组丙型肝炎病毒(HCV)多表位抗原的方法和应用。具体地，所述重组HCV多表位抗原包含了HCV基因组中的Core蛋白和/或NS3蛋白的优势抗原表位，其特征在于，通过引入寡聚(PDDDDPG)结构，调节融合蛋白等电点，促进包涵体形成，以避免目标蛋白的细胞毒性及大肠杆菌蛋白酶对目标蛋白的降解，寡聚结构后引入Xa因子酶切位点(IEGR)，目的蛋白C末端添加有His标签。本发明提供的产品，具有表达量高，产品均一性强，纯化步骤简单，易于操作的优点。CN102867ACCNN110228610702286117A权利要求书1/1页1.一种高效表达重组丙型肝炎病毒多表位抗原的方法，包含丙肝病毒Core蛋白和/或NS3蛋白，其特征在于，上述目的蛋白的N端引入寡聚(PDDDDPG)m结构调节融合蛋白等电点，寡聚结构后连接Xa因子酶切位点(IEGR)，目的蛋白C末端添加有His标签。2.根据权利要求1所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，其中，所述Core蛋白源自如SEQIDNO.1所述的天然Core蛋白3.根据权利要求1所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，其中，所述NS3蛋白源自如SEQIDNO.2所述的天然NS3蛋白。4.根据权利要求1所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，其中，所述N端寡聚结构(PDDDDPG)m，m表示(PDDDDPG)的重复单元数，优选地，m值取自0～5范围内任意整数，更优选地，m值为3。5.根据权利要求2所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，其中，所述的Core蛋白，经至少如下方式修饰：a.RKTKRNTNRRPE(9-20残基)；b.KDRRSTGKAWGKPGRPWPLYGNEGL(67-91残基)；c.HRSRNVGKVIDTLTCGFADLMGYIPVV(114-140残基)。6.根据权利要求3所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，其中，所述的NS3蛋白，经至少如下方式修饰：a.TLDVVTRSPTFSDNSTPPAVPQTYQVGYLH(9-38残基)；b.TGVRTVMTGEA(89-99残基)；c.DIEEVGLGREGEIPFYGRAIPLSC(180-203残基)。7.根据权利要求1-6所述的重组丙型肝炎病毒多表位抗原，用以制备丙型肝炎的核酸疫苗、多肽疫苗以及HCV抗原或抗体的检查试剂。2CCNN110228610702286117A说明书1/3页一种高效表达重组丙型肝炎病毒多表位抗原的方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，涉及一种高效表达重组丙型肝炎病毒多表位抗原的方法和应用。背景技术[0002]我国为丙型肝炎(HCV)的高发区，约有5000万感染者，占到全球40％的份额。丙肝是肝硬化及肝癌的主要原因，在输血等治疗中有极高的传染率。公众对丙肝认知水平也较低，在83％的有丙肝高危险人群中，仅有5％检测过丙肝。目前既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加以预防和阻止其进一步传播。因此，HCV的早期诊断对于筛查HCV的传染源、指导临床治疗和预后判断有重大意义，其中HCV的血源筛查是控制丙肝蔓延的最重要手段和政府高度重视的措施。[0003]丙型肝炎发病缓慢、迁延，血液中病毒滴度极低，对于检测技术灵敏度要求较高。HCV的Core和NS3蛋白含有较强的优势抗原表位，其相应的抗体出现早/阳性率高，能够有效的满足血源筛查的需求，是目前第二代、第三代HCV免疫诊断的重要成分。J.A.NEVILLEetal(1997)JournalofClinicalMicrobiology35：3062；Maaritetal(2009)VirologyJournal6：84。当前强生分公司Ortho和Abott公司HCV诊断试剂中，所用到的Core蛋白和NS3蛋白，各自由大肠杆菌和酵母表达系统分别表达。[0004]国内一些研究将Core蛋白和NS3蛋白串联表达，所得重组抗原可以有效的检测出血清中的HCV