一种复合多表位表达盒、其组成的重组病毒及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108546302A(43)申请公布日2018.09.18(21)申请号201810394542.XC12N7/01(2006.01)(22)申请日2018.04.27A61K39/17(2006.01)A61K39/215(2006.01)(71)申请人中国农业科学院上海兽医研究所A61P31/14(2006.01)(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)地址200241上海市闵行区紫月路518号(72)发明人丁铲邵华斌谭磊温国元于圣青仇旭升廖瑛孟春春孙英杰宋翠萍(74)专利代理机构北京品源专利代理有限公司11332代理人巩克栋(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)权利要求书1页说明书13页序列表10页附图5页(54)发明名称一种复合多表位表达盒、其组成的重组病毒及应用(57)摘要本发明涉及一种复合多表位表达盒、其组成的重组病毒及应用，尤其涉及一种新城疫病毒插入IBV表位盒嵌合重组病毒和采用这个病毒制备的疫苗，所述表达盒包含有：(a)来源于鸡传染性支气管炎病毒Holte株和鸡传染性支气管炎病毒QX样株的S1蛋白的T细胞表位；(b)来源于鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株的S1蛋白的B细胞表位。本发明将鸡传染性支气管炎病毒的多表位嵌合S-T/B基因插入至LaSota株的骨架中，使得LaSota株可以表达S1-T/B蛋白，可达到同时预防ND和IB两种疫病的目的，且T细胞表位和B细胞表位协同增效，使得病毒免疫时间更早，免疫反应更全面。CN108546302ACN108546302A权利要求书1/1页1.一种复合多表位表达盒，其特征在于，所述表达盒包含有：(a)来源于鸡传染性支气管炎病毒Holte株和鸡传染性支气管炎病毒QX样株的S1蛋白的T细胞表位；(b)来源于鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株的S1蛋白的B细胞表位。2.根据权利要求1所述的复合多表位表达盒，其特征在于，所述T细胞表位的氨基酸序列如SEQIDNO.1-4所示；优选地，所述B细胞表位的氨基酸序列如SEQIDNO.5-7所示；优选地，所述T细胞表位和B细胞表位中的不同表位采用柔性小分子linker连接；优选地，所述柔性小分子linker为KAA、AAY、AAA、GAAA、KAAA，其核苷酸序列如8-12所示。3.根据权利要求1或2所述的复合多表位表达盒，其特征在于，所述表达盒前后还包含酶切位点；优选地，所述酶切位点为SpeI、XhoI、BamHI、EcoRI、NdeI、PstI或XhoI中的任意一种，优选为SpeI和XhoI；优选地，所述表达盒前的酶切位点之后还包含KOZAK序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；优选地，所述表达盒的氨基酸序列如SEQIDNO.14所示；优选地，所述表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示。4.一种复合多表位，其特征在于，所述复合多表位包含权利要求1-3中任一项所述的复合多表位表达盒。5.根据权利要求4所述的复合多表位，其特征在于，所述复合多表位以新城疫病毒LaSota株为骨架；优选地，所述复合多表位表达盒插入新城疫病毒LaSota株的M基因和F基因之间；优选地，所述新城疫病毒LaSota株中的HN基因替换为新城疫病毒TS09-C株中的HN基因；优选地，所述新城疫病毒TS09-C株中的HN基因的氨基酸序列如SEQIDNO.16所示，核苷酸序列如SEQIDNO.17所示。6.编码如权利要求1-3中任一项所述复合多表位表达盒或权利要求4或5所述复合多表位的基因。7.一种重组病毒，其特征在于，其包括权利要求6所述的基因。8.一种复合多表位疫苗，其特征在于，其包括权利要求7所述的重组病毒。9.如权利要求6所述的基因、如权利要求7所述的重组病毒或如权利要求8所述的复合多表位疫苗用于制备治疗新城疫和/或鸡传染性支气管炎的药物。10.如权利要求6所述的基因、如权利要求7所述的重组病毒或如权利要求8所述的复合多表位疫苗用于治疗新城疫和/或鸡传染性支气管炎。2CN108546302A说明书1/13页一种复合多表位表达盒、其组成的重组病毒及应用技术领域[0001]本发明涉及基因和蛋白质工程领域，具体涉及一种复合多表位表达盒、其组成的重组病毒及应用，尤其涉及一种新城疫病毒插入IBV表位盒嵌合重组病毒和采用这个病毒制备的疫苗。背景技术[0002]ND(防治新城疫，Newcastledisease)是一种急性高度致死性的禽类疫病，世界动物卫生组织(OIE)要求必须上报的传染性。ND的病原为新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，NDV)，为副黏病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Avu