核酸纯化柱系统及其在核酸提取中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103087903103087903B(45)授权公告日2015.01.21(21)申请号201310045866.X(22)申请日2013.02.05(73)专利权人杭州百迈生物技术有限公司地址310007浙江省杭州市西湖区西溪路525号浙大科技园A东628室(72)发明人林源吉吕航(51)Int.Cl.C12M1/12(2006.01)C12N15/10(2006.01)审查员汪一帆权权利要求书1页利要求书1页说明书5页说明书5页附图5页附图5页(54)发明名称核酸纯化柱系统及其在核酸提取中的应用(57)摘要本发明提供了提供一种核酸纯化柱系统及该系统在核酸提取上的应用。该核酸纯化柱系统包括两个相互独立又能上下位叠加在一起的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内。本发明采用可相互叠加的纯化柱系统，满足实验的连续性操作和不同样本之间的转化作用。CN103087903BCN103879BCN103087903B权利要求书1/1页1.连续负压抽气提取核酸的方法，包括以下提取步骤：1)取30ml在LB培养基中培养过夜的高拷贝数质粒菌液，或100ml过夜培养的低拷贝质粒/Cosmid菌液置于离心管中，以大于等于3,000×g离心8min，弃上清；2)加4.5ml的溶液I悬浮细菌沉淀；3)加4.5ml溶液II，温和并充分地上下翻转6-8次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液；此步骤不超过5min；向透明溶液中加4.5ml4℃预冷的溶液III，温和并充分地上下翻转10次混合均匀，直至形成紧实的凝集块，室温放置5min；4)利用核酸纯化柱系统，并将核酸纯化柱系统居于下方的生物样品制备柱插到负压装置的插口上；将步骤3中所得溶液缓慢加入居于上方的制备柱中，开启并调节负压至-25至-30英寸汞柱，缓慢吸走制备柱中溶液；所述的核酸纯化柱系统，至少包括两个组合在一起使用的生物样品制备柱，所述生物样品制备柱分别包括本体，本体的上部具有加样口，本体的下部具有出样管嘴，其特征在于，生物样品制备柱的加样口上部设置有一保持部件，其中居于上方的制备柱下部紧密扣合在居于下方的制备柱保持部件内，使所述的两个制备柱相互独立又能上下位叠加在一起；5)待步骤4中的溶液吸干后，移除居于上方的制备柱，继续保持负压，向居于下方的制备柱中加5ml溶液IV，吸尽制备柱中溶液；6)向居于下方的制备柱中加5ml溶液V，吸尽管中溶液；7)将步骤6中的制备柱置于洁净的15ml离心管中，加0.3ml溶液V，8,000×g离心5min；8)将步骤7中的制备柱置于另一洁净的15ml离心管中，加0.3ml洗脱液或去离子水，室温静置1min，8,000×g离心2min收集得到质粒DNA；其中：溶液I包括2mmol/LKH2PO4，10mmol/LNa2HPO4·12H2O，137mmol/LNaCl，2.7mmol/LKCl，1％Tween20，pH6.0-8.0，加入RNaseA后，混合均匀，4℃贮存；溶液II包括0.1-2.5mol/LNaOH，0.05％-1％SDS室温密闭贮存；溶液III包括0.1-0.5mol/L(NH4)2HPO4·NH4H2PO4，0.5-3mol/LKCl，pH4.5；溶液IV包括200mmol/LTris，2MEDTA，1.5mol/LNaCl，3mol/LGuHCl，室温密闭贮存；溶液V包括50-100％无水乙醇；洗脱液包括2.5mmol/LTris-HCl，pH8.5，室温密闭贮存。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的居于下方的制备柱保持部件的内径与居于上方的制备柱下部的外径相同。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，居于上方的制备柱的出样管嘴的外周还包括固定框，所述固定框插入居于下方的制备柱保持部件内，该固定框的外径与居于下方的制备柱的保持部件的内径相同，制备柱出样管嘴包括出口端，所述出口端暴露在固定框外。2CN103087903B说明书1/5页核酸纯化柱系统及其在核酸提取中的应用技术领域[0001]本发明涉及生物样品提取领域，尤其涉及一种核酸纯化柱系统及该系统在核酸提取的应用。背景技术[0002]在生物学领域，经常需要对样品进行过滤和纯化。尤其是在分子生物学领域，经常需要提取生物样品中的DNA、RNA等大分子物质，并对这些大分子物质进行分离纯化。高效率地分离纯化核酸物质成为分子生物学领域的关键技术。利用制备柱从生物样品中分离和提取核酸已经成为分子生物学领域常用的手段。通常的制备柱为一个圆形