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不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较摘要：比较3种不同DNA提取试剂盒（宝生物、天根、LGC）在转基因产品检测中的应用效果分别提取玉米、水稻和大豆种子的基因组DNA。结果表明天根DNA提取试剂盒DP305更为适合从作物种子中提取基因组DNA进行转基因成分检测。关键词：DNA提取试剂盒；基因组DNA；作物；比较中图分类号：Q943.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）08-1956-03随着转基因作物种类的增多和种植面积的增加[1]转基因种子的应用越来越广泛。转基因技术在提高作物产量、改善作物品质、缓解粮食危机等方面作出了巨大贡献然而其安全性方面的不确定因素也带来了转基因生物安全问题[23]。2001年发布实施了《农业转基因生物安全管理条例》对农业转基因作物及其产品实行安全评价制度、生产许可制度、经营许可制度和产品标识制度[45]。因此需要对作物种子进行转基因检测而基因组DNA提取作为转基因检测中的关键步骤需要稳定、重复性好、简便快捷的方法进行提取。基因组DNA提取的方法有很多[6-8]目前广泛使用的是商业化的基因组DNA提取试剂盒[9]常见的DNA提取试剂盒主要分为3类：离心柱型、无毒型（不使用酚氯仿）、磁珠型。本研究使用常见的不同DNA提取试剂盒对玉米、水稻、大豆种子的基因组DNA提取效果进行比较确定了适合转基因检测使用的DNA提取试剂盒。1材料和方法1.1材料转基因玉米MON810、转基因水稻科丰6号、转基因大豆GTS40-3-2均为农业部发放的标准品。1.2试剂与仪器天根DP305DNA提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司宝生物D9093DNA提取试剂盒购自沈阳联星生物技术公司LGC41602DNA提取试剂盒购自北京昊诺斯科技有限公司PCR反应试剂均购自宝生物工程（大连）有限公司。5424型高速离心机购自德国Eppendorf公司ND2000型DNA定量仪购自美国Thermo公司C1000型PCR仪及GelDocXR+凝胶成像系统购自美国Bio-Rad公司BG-600k核酸水平电泳系统购自北京百晶生物技术有限公司。1.3方法1.3.1转基因作物基因组DNA的提取使用3种DNA提取试剂盒分别提取转基因玉米MON810、转基因水稻科丰6号和转基因大豆GTS40-3-2的基因组DNA操作方法具体见试剂盒说明书。测定其DNA浓度及OD260nm/OD280nm。DNA提取率（μg/g）=DNA浓度（ng/μL）×体积（μL）/取材量（g）[5]。1.3.2PCR扩增验证通过扩增筛选因子CaMV35S启动子基因来检测3种DNA试剂盒提取的基因组DNA在转基因成分检测中的效果试验重复3次。PCR扩增引物和扩增条件[10]见表1。2结果与分析2.13种DNA提取试剂盒提取基因组DNA的效果比较结果3种DNA试剂盒所提取的DNA及相关结果见表2。从表2中可以看出LGCDNA试剂盒提取率最高成本最高；宝生物试剂盒提取率次之提取时间也较长成本也较高；天根试剂盒提取率最低成本也最低。在操作过程中还发现LGC试剂盒和宝生物试剂盒的操作步骤比较繁琐天根试剂盒的操作最简便快捷。3种DNA提取试剂盒提取的基因组DNA浓度和纯度比较见图1和图2。从图1中可以看出无论是玉米、水稻还是大豆LGC试剂盒提取的DNA浓度为最高宝生物和天根试剂盒提取的玉米和水稻的DNA浓度比较接近但提取的大豆DNA浓度有明显差异天根试剂盒提取的较低。从图2中可以看出就大豆而言天根试剂盒提取DNA纯度最高宝生物试剂盒提取的次之LGC试剂盒提取的最低；就玉米而言LGC试剂盒提取的DNA纯度最高宝生物试剂盒提取DNA纯度次之天根试剂盒提取的最低；就水稻而言LGC试剂盒提取的DNA纯度最高天根试剂盒提取DNA纯度次之宝生物试剂盒提取的最低。2.23种DNA试剂盒提取基因组DNA的PCR验证结果分析使用3种DNA试剂盒分别提取的玉米、水稻、大豆种子的基因组DNA进行PCR反应扩增CaMV35S启动子基因结果如图3。从图3中可以看出在均取1μLDNA进行PCR反应的情况下PCR反应扩增CaMV35S启动子来检测提取的DNA宝生物和天根试剂盒的图谱较清晰LGC试剂盒效果较差。3小结与讨论天根试剂盒采用的是离心柱法DNA损耗量较大但是对于日常检测提取的样品是足够使用的。由于其对样品需求量小、耗时短、操作简单、成本低、纯度好在日常检测中应用较广。宝生物试剂盒在样品使用量上