TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107677834A(43)申请公布日2018.02.09(21)申请号201710872073.3(22)申请日2017.09.25(71)申请人辽宁迈迪生物科技股份有限公司地址117000辽宁省本溪市经济开发区香槐路166栋(72)发明人李文欣苏春阳刘峰(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人齐云(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用(57)摘要本发明提供了一种TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用，涉及生物化学检测技术领域，本发明提供的TAFIa含量的检测方法，通过测量TAFIa酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量，具有灵敏度高、反应速度快、条件温和、无毒无害、成本低廉等优点。本发明提供的用于检测TAFIa含量的试剂盒，包括TAFIa标准品、底物、氨基酸氧化酶及(a)过氧化物酶、香草酸和4-氨基安替比林或(b)化学发光剂。利用该试剂盒检测TAFIa的含量，具有灵敏度高、特异性强、反应速度快的优点，并且操作方法简单，不需要复杂的专业技术。CN107677834ACN107677834A权利要求书1/1页1.一种TAFIa含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：通过测量TAFIa酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量；所述酶促反应的产物为过氧化氢。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：将含有TAFIa的样本与底物混合进行反应，生成游离的氨基酸，将所述游离的氨基酸进行氧化处理，得到所述酶促反应的产物，通过测量所述酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述底物为苯甲酰苯丙氨酰精氨酸、苯甲酰酪氨酰精氨酸、苯甲酰色氨酰精氨酸、苯甲酰苯丙氨酰赖氨酸、苯甲酰酪氨酰赖氨酸或苯甲酰色氨酰精氨酸中的一种。4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述游离的氨基酸为游离的精氨酸或赖氨酸。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述氧化处理为加入精氨酸氧化酶或赖氨酸氧化酶。6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述测量TAFIa酶促反应的产物的含量为利用化学反应产生的颜色变化或发光强度进行测定。7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：利用TAFIa标准品建立标准曲线。8.一种用于检测TAFIa含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：TAFIa标准品、底物、氨基酸氧化酶及如下(a)或(b)：(a)过氧化物酶、香草酸和4-氨基安替比林；(b)化学发光剂。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：TAFIa标准品、苯甲酰苯丙氨酰精氨酸、精氨酸氧化酶及如下(a)或(b)：(a)过氧化物酶、香草酸和4-氨基安替比林；(b)鲁米诺、氯化钴或HRP。10.如权利要求1-7任一项所述的检测方法或权利要求8或9所述的试剂盒在TAFIa含量的体外检测中的应用。2CN107677834A说明书1/7页TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用技术领域[0001]本发明涉及生物化学检测技术领域，尤其是涉及一种TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用。背景技术[0002]凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin-activatablefibrinolysisinhibitor，TAFI)又称为羧肽酶原U(procarboxylpeptidaseU)，是由肝脏合成的一种糖蛋白。TAFI以酶原的形式存在于血浆中，可被凝血酶、纤溶酶、凝血酶-血栓调节蛋白复合物等激活，将TAFI切割为两部分：含92个氨基酸的TAFI激活肽(TAFIactivationpeptide)和393个氨基酸的TAFIa，这一过程称为TAFI的激活。TAFIa具有生理活性，可以水解纤维蛋白C末端的赖氨酸，使纤溶酶原不能被激活，从而发挥了纤溶抑制的作用。[0003]TAFI在纤溶过程中发挥了重要的调控作用，因此TAFI浓度与某些心脑血管疾病有相关性。如冠状动脉疾病、静脉血栓、心绞痛、局部缺血性中风等均和TAFI水平呈正相关。由于TAFI被激活为TAFIa之后才发挥其纤溶调控作用，检测血液中的TAFIa含量可以直观地反映纤溶过程。[0004]TAFIa的检测有诸多难点：(1)TAFIa会由于蛋白构象的改变而转变为无活性的TAFIai，这一过程使得TAFIa在37℃下的半衰期只有8-15分钟；(2)TAF