确定肿瘤样品中存在靶抗原的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110114674A(43)申请公布日2019.08.09(21)申请号201780076410.6(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所(22)申请日2017.12.1111247代理人胡志君黄革生(30)优先权数据16203724.62016.12.13EP(51)Int.Cl.G01N33/50(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日G01N33/68(2006.01)2019.06.11C07K16/28(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2017/0821122017.12.11(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/108759EN2018.06.21(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人M·盖格尔C·克莱因权利要求书1页说明书55页序列表48页附图17页(54)发明名称确定肿瘤样品中存在靶抗原的方法(57)摘要本发明涉及基于细胞的确定原发肿瘤样品中抗原表达的新测定法。该方法进一步涉及确定原发肿瘤样品中的抗原和蛋白酶表达。该方法允许稳健确定抗原和/或蛋白酶表达，无需消化肿瘤样品。该方法进一步允许为治疗肿瘤选择抗体和选择蛋白酶可切割接头。CN110114674ACN110114674A权利要求书1/1页1.确定肿瘤样品中存在靶抗原的体外方法，包括步骤：i)提供肿瘤样品；ii)提供报道细胞，所述报道细胞包含信号转导性细胞表面受体控制下的报道基因；iii)向肿瘤样品添加双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：a)能够与靶抗原特异性结合的第一抗原结合部分；和b)能够与信号转导性细胞表面受体特异性结合的第二抗原结合部分；iv)向肿瘤样品添加报道细胞；和v)通过确定报道基因的表达，确定靶抗原的存在。2.根据权利要求1所述的方法，其中报道基因表达提示第一抗原结合部分与靶抗原结合。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述双特异性抗体额外地包含：c)通过蛋白酶可切割接头与第二抗原结合部分共价连接的掩蔽部分，其中掩蔽部分能够与第二抗原结合部分的独特型特异性结合，由此可逆地遮蔽第二抗原结合部分。4.根据权利要求3所述的方法，其中报道基因表达提示肿瘤样品中的蛋白酶表达。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中肿瘤样品是肿瘤组织样品，尤其是来自患者的活组织检查样品。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中蛋白酶表达提示恶性肿瘤。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中报道细胞包含编码反应元件控制下的报道基因的DNA序列和编码信号转导性细胞表面受体的DNA序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中第二抗原结合部分能够与CD3ε特异性结合。9.根据权利要求3至8中任一项所述的方法，其中掩蔽部分是抗独特型scFv。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中第一和第二抗原结合部分是包含共同轻链的常规Fab分子。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中靶抗原是细胞表面受体。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中靶抗原是FolR1。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中靶抗原是与人主要组织相容性复合体(MHC)的分子结合的肽。14.选择用于治疗肿瘤的双特异性抗体的体外方法，其中双特异性抗体包含：a.能够与靶抗原特异性结合的第一抗原结合部分；和b.能够与信号转导性细胞表面受体特异性结合的第二抗原结合部分；其中所述方法包括根据权利要求1至13中任一项所述的方法，确定肿瘤样品中靶抗原的存在并且其中如果检测到报道基因表达，则选择双特异性抗体用于治疗肿瘤。15.基本上如前文所述的方法。2CN110114674A说明书1/55页确定肿瘤样品中存在靶抗原的方法技术领域[0001]本发明涉及基于细胞的确定原发肿瘤样品中抗原表达的新测定法。该方法进一步涉及确定原发肿瘤样品中的抗原和蛋白酶表达。该方法允许稳健确定抗原和/或蛋白酶表达，无需消化肿瘤样品。该方法进一步允许为治疗肿瘤选择抗体及选择蛋白酶可切割接头。背景技术[0002]直至现在，化疗仍是一个最常使用的癌症疗法。另外，基于抗体的疗法已经历最近15年演进并且现在代表肿瘤治疗方面有价值的组合或化疗方案替代。不同于化疗，抗体疗法靶向癌细胞上的特定抗原，因此允许定向性更强的治疗，因而减少对健康组织的副作用。在基于抗体的治疗用药剂开发中，需要多种测定法以鉴定最佳候选物来投入临床试验并最终投入市场。在最早期临床前阶段，必须生成抗体并分析它们的靶特异性，以及它们对靶的亲和力和功能。可以使用各种蛋白质-蛋白质相互作用测定法，如基于FRET的方法、表面等离子体共振(SPR)、荧光激活细胞分选法(FACS)或AlphaScreen