一种新型双功能抗体及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110551222A(43)申请公布日2019.12.10(21)申请号201910799056.0(22)申请日2019.08.27(71)申请人重庆市畜牧科学院地址402460重庆市荣昌区昌州街道昌龙大道51号申请人重庆金迈博生物科技有限公司(72)发明人葛良鹏余琳邹贤刚(74)专利代理机构重庆弘旭专利代理有限责任公司50209代理人文巍(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)C12N15/13(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图5页(54)发明名称一种新型双功能抗体及其用途(57)摘要本发明提供了一种抗体，包含了蛋白二聚体，所述蛋白二聚体包括：第一功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别特定抗原的抗体结合位点；第二功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别特定抗原的抗体结合位点，其特征在于：所述第一功能域由第一VH结构域和第一VL结构域组成，第二功能域由第二VH结构域组成。VH为重链可变区，VL为轻链可变区。本发明提供的双功能抗体，半衰期大大提高；且同源二聚体极少，即使出现聚集体，仅一次纯化就可鉴别和去除。CN110551222ACN110551222A权利要求书1/1页1.一种抗体，包含了蛋白二聚体，所述蛋白二聚体包括：第一功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别特定抗原的抗体结合位点；第二功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别特定抗原的抗体结合位点，其特征在于：所述第一功能域由第一VH结构域和第一VL结构域组成，第二功能域由第二VH结构域组成；VH为重链可变区，VL为轻链可变区。2.如权利要求1所述的抗体，还包括第三功能域，所述第三功能域包括第一Fc结构域和第二Fc结构域，第一Fc结构域与第一VL结构域相连，第二Fc结构域与第二VH结构域相连。3.如权利要求1或2所述抗体，第一功能域包含免疫球蛋白链或特异性识别CD3抗原的抗体结合位点；第二功能域包含免疫球蛋白链或特异性识别GPC3抗原的抗体结合位点。4.如权利要求3所述抗体，所述第一功能域包括CD3单克隆抗体的VH-VL功能域（ScFv），通过铰链与第一人IgG1Fc功能域相连；所述第二功能域包括抗GPC3单克隆抗体的VH功能域，通过铰链与第二人IgG1Fc功能域相连。5.如权利要求1或2所述抗体，所述第一功能域与第二功能域通过铰链区二硫键相连。6.如权利要求1所述抗体，所述抗GPC3VH-Fc链的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。7.如权利要求1或6所述抗体，抗CD3VH-Fc链氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。8.一种核苷酸分子，包含SEQIDNO.2和/或SEQIDNO.4所示片段。2CN110551222A说明书1/5页一种新型双功能抗体及其用途技术领域[0001]本发明涉及一种双功能抗体，具体涉及新型双功能抗体。背景技术[0002]双特异性抗体(BsAb)又称双功能抗体，可同时识别和结合两种不同的抗原和表位，并阻断两种不同的信号通路以发挥其作用。根据不同结构可将双特异性抗体结构主要有2大类：含Fc片段的双特异性抗体(IgG-like双特异性抗体)与不含Fc片段的双特异性抗体(non-IgG-like双特异性抗体)。[0003]双特异性抗体的一个重要作用机制是介导免疫细胞杀伤，双特异性抗体有两条抗原结合臂，其中一条与靶抗原结合，另一条与效应细胞上的标记抗原结合，后者可以激活效应细胞，使其靶向杀伤肿瘤细胞。目前已经批准上市的2个双特异性抗体产品都属于这个类别，TrionPharma公司开发的catumaxomab能够靶向肿瘤表面抗原EpCAM和T细胞表面受体CD3，而Micromet公司和Amgen公司开发的Blinatumomab可以同时结合CD19和CD3。两者都是通过激活并召集杀伤性T细胞，从而达到治疗肿瘤的目的。但是blinatumomab抗体，已被证明只有几个小时很短的血液半衰期。[0004]但是目前已有的多种双功能抗体形式普遍面临易聚集、纯化产量低、稳定性差或血液半衰期短等问题。CN104829726A提供了一种双特异性CD19XCD3抗体，但是该抗体易于形成同源二聚体，难以鉴别、去除，极大增加了纯化和鉴定难度，使其工业化应用收到限制。[0005]肝细胞肝癌占原发性肝癌的70-90％，许多病人被确诊时已是晚期不能进行外科手术切除或射频消融等方法。目前临床被批准用于晚期HCC治疗的药物只有Sorafenib、Regorafenib和Lenvatinib多靶点激酶抑制剂，但仍对一些患者治疗有限，迫切需要新的治疗方式联合治疗。重新定向T细胞杀伤癌细胞的策略已被证明能够有效的治疗或辅助治疗癌症，如已经被FDA批准上市的CD3/CD19的双功能抗体