一种双特异性抗体及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110669135A(43)申请公布日2020.01.10(21)申请号201910576333.1G01N33/68(2006.01)(22)申请日2019.06.28(66)本国优先权数据201810720048.82018.07.03CN(71)申请人上海健信生物医药科技有限公司地址201114上海市闵行区新骏环路189号一层C136室(72)发明人刘佳建(74)专利代理机构上海弼兴律师事务所31283代理人薛琦吕学辰(51)Int.Cl.C07K16/46(2006.01)A61K39/395(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书3页说明书35页A61P35/02(2006.01)序列表30页附图8页(54)发明名称一种双特异性抗体及其用途(57)摘要本发明公开了一种双特异性抗体及其用途。所述的双特异性抗体第一蛋白功能区和第二蛋白功能区，所述第一蛋白功能区为靶向TIM-3的蛋白功能区，第一蛋白功能区所对应的靶向TIM-3的TIM-3全长抗体与猕猴(Macaca)TIM-3有弱结合活性，与狨猴(Marmoset)和人TIM-3有强结合活性并能够激活人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。所述的双特异性抗体既能保留单个TIM-3抗体所具有的激活PBMC(NK)杀伤肿瘤细胞的活性，也能够保持另一个蛋白功能区的原有活性，并能够达到和两个分子联用相当或者更好(协同效应)激活T淋巴细胞的活性。本发明的双特异性抗体(例如LB141)在治疗中具有比PD-1抗体单独治疗或TIM-3抗体和PD-1抗体联合使用更优异的效果。CN110669135ACN110669135A权利要求书1/3页1.一种双特异性抗体，其包含第一蛋白功能区和第二蛋白功能区，所述第一蛋白功能区为靶向TIM-3的蛋白功能区，其特征在于，所述的第一蛋白功能区所对应的靶向TIM-3的TIM-3全长抗体与猕猴(Macaca)TIM-3有弱结合活性，所述的弱结合活性为ELISA测定的EC50值高于1nM，优选高于10nM，更优选检测不到EC50值；且与狨猴(Marmoset)和人TIM-3有强结合活性并能够激活人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用；所述的强结合活性为ELISA测定的EC50值低于1nM；更优选低于0.5nM；进一步更优选地低于0.2nM；所述的激活人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用为：和本底即抗体浓度为0μg/mL相比，被杀死的肿瘤细胞增加3％以上，优选5％以上，更优选10％以上。2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述的第一蛋白功能区，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:1-3所示的CDR，或者如序列表中SEQIDNO:4-6所示的CDR；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:7-9或者SEQIDNO:10-12所示的CDR；较佳地，所述的第一蛋白功能区，其重链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:1-3所示的CDR，其轻链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:7-9所示的CDR；或者，其重链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:4-6所示的CDR，其轻链可变区包含氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:10-12所示的CDR；更佳地，如序列表中SEQIDNO:1-3所示的序列依次分别为重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；如序列表中SEQIDNO:7-9所示的序列依次分别为轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；如序列表中SEQIDNO:4-6所示的序列依次分别为重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；如序列表中SEQIDNO:10-12所示的序列依次分别为轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3。3.如权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述的第一蛋白功能区，其重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:13或者15所示；和/或，其轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:14或者16所示；较佳地，所述的第一蛋白功能区，其重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:13所示，且其轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:14所示；或者其重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:15所示，且其轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:16所示。4.如权利要求1-3中任一项所述的双特异性抗体，其特征在于，所述的第一蛋白功能区或第二蛋白功能区为免疫球蛋白、scFv、Fab、Fab’或者F(ab’)2；较佳地，所述的第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述的第二蛋白功能区为scFv；或者所述的第一蛋白功能区为scFv，所述的第二蛋白功能