一种捕获核酸分子的方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112342269A(43)申请公布日2021.02.09(21)申请号201910733022.1(22)申请日2019.08.09(71)申请人深圳市真迈生物科技有限公司地址518024广东省深圳市罗湖区清水河街道清水河一路116号深业进元大厦2座5楼、6楼(72)发明人李改玲甘广丽李妍骆明杰张萌孙雷(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6869(2018.01)C12N15/10(2006.01)C40B50/06(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表2页附图1页(54)发明名称一种捕获核酸分子的方法及其应用(57)摘要本发明涉及一种核酸分子的捕获方法及其应用。本发明公开了一种捕获核酸分子方法，所述的核酸分子由第一核酸链和第二核酸链组成，所述第一核酸链和第二核酸链部分匹配形成双链区且核酸分子至少一端为单链区，该方法包括将探针与核酸分子接触，使探针与核酸分子的单链区域结合，形成杂交复合体，通过该方法捕获核酸分子，一方面可以捕获双链核酸分子，另一方面可以捕获单链分子，利用此方法捕获核酸分子，可大大提高捕获效率。同时，本发明公开了利用此捕获方法获得的杂交复合体及其在测序中的应用。CN112342269ACN112342269A权利要求书1/1页1.一种捕获核酸分子的方法，其特征在于，所述核酸分子包括互补的第一核酸链和第二核酸链，所述核酸分子具有至少一个单链末端，至少一个所述单链末端位于所述第一核酸链上，该方法包括：利用探针捕获所述核酸分子，使所述探针和所述第一核酸链上的至少一部分互补结合，以获得杂交复合体，所述第一核酸链上的至少一部分包含所述单链末端。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链末端位于所述第一核酸链的3’端；任选地，所述探针为寡核苷酸单链；任选地，所述探针的长度为20～80nt；任选地，所述探针的3’末端的核苷酸含有羟基；任选地，所述探针固定在固体介质上，所述固体介质选自玻璃、塑料和磁珠中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子通过连接第一核酸片段和第二核酸片段而获得，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段均为双链DNA，所述第一核酸片段为已知序列，所述第一核酸片段包括互补的第一链和第二链，所述单链末端位于所述第一链上；任选地，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段通过平末端连接和/或粘性末端连接以获得所述核酸分子；任选地，所述第一链的5'端具有磷酸基团；任选地，所述第二链的3’端无羟基。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，80℃≥(Tm1-Tm2)≥10℃并且90℃≥Tm1≥50℃，Tm1为所述第一链的溶解温度，Tm2为所述第二链的溶解温度；任选地，所述第一链的所有序列与探针互补配对；任选地，所述Tm1为71℃，Tm2＝45.6℃；任选地，Tm2-5℃≤T≤Tm1-5℃，T为进行所述捕获的温度；任选地，所述第一链的3’端带有光学可检测标记；任选地，所述光学可检测标记为荧光分子。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在进行所述捕获之前，使所述核酸分子解链为单链核酸分子。6.一种杂交复合体，其特征在于，所述的杂交复合体通过权利要求1-5任一所述的方法获得。7.一种试剂盒，包括权利要求1-5任一所述的核酸分子。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含所述探针；任选地，所述试剂盒还包括所述杂交复合体。9.权利要求7或8所述的试剂盒在序列杂交捕获和/或测序中的用途。10.一种测序方法，其特征在于，包括对杂交复合体进行序列测定，所述杂交复合体利用权利要求1-5任一所述的方法获得。2CN112342269A说明书1/10页一种捕获核酸分子的方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子生物学领域。具体而言，本发明涉及核酸分子的捕获方法、及其应用。背景技术[0002]序列捕获技术是针对已知的特定基因组区域设计探针进行有选择性的分离或者富集基因组的特定片段。常用的序列捕获的方法有探针捕获、PCR捕获。利用探针捕获的方法进行序列捕获通常是利用探针与目标序列互补的特性，捕获目标序列，所捕获的目标序列也是单链序列。[0003]二代测序和单分子测序在文库构建方面，常常涉及DNA片段与特定接头的接头连接形成测序文库。接头的种类直接影响连接效率，同时影响测序文库中有效文库的比率。不同的测序平台需要不同的测序接头，各平台都需要优化建库方法和所用的接头，如Illumina建库中，Y接头和Bubble接头具有不同的优势。测序领域中，上机前的样本处理包括核酸处理、文库构建等还待进一步优化，以提高建库效率、简化操作流程。发明内容[0004]本发明提供一种