一种核酸分离方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102836423A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102836423A(43)申请公布日2012.12.26(21)申请号201110165142.X(22)申请日2011.06.20(71)申请人杜权地址100038北京市海淀区复兴路甲一号院19-3-602申请人杜军(72)发明人杜权杜军(51)Int.Cl.A61K39/00(2006.01)C07H21/00(2006.01)C07K1/26(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书1818页页附图附图44页(54)发明名称一种核酸分离方法及其应用(57)摘要本发明提供了一种核酸的分离方法，具体来讲是根据核酸分子在溶液中的电荷性质，使其在电场中得到选择性分离的方法；进一步的，本发明提供了用于该方法的分离装置、以及该方法及装置在核酸分离中的应用。CN1028364ACN102836423A权利要求书1/1页1.一种核酸分离方法，其特征在于该方法包括以下步骤：1)获得一种电泳槽，该电泳槽包括至少两个固定分隔的或可操作性分隔的电泳区域，在不影响大分子正常电泳行为的情况下，这些分隔使不同电泳区域内的溶液能够被单独收集；2)将包含待分离核酸的溶液加入到电泳槽中，3)施加外加电场，使溶液中的核酸分子选择性地分布于一个被分隔的或被可操作性分隔的电泳区域，从而得到分离。2.根据权利要求1所述的核酸分离方法，其特征在于用于固定分隔不同电泳区域的材料包括琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、带孔或微孔的固相支持物。3.根据权利要求1所述的核酸分离方法，其特征在于用于可操作性分隔不同电泳区域的方式包括阀门、开关、可阻断性流道。4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽还包括选择性核酸分离部件。5.根据权利要求4所述的核酸分离方法，其特征在于所述选择性择性核酸分离部件包括DEAE纤维素膜、透析膜、半透膜或滤膜。6.根据权利要求1所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽包括两个固定分隔的或可操作性分隔的电泳区域，在不影响大分子正常电泳行为的情况下，这些分隔使不同电泳区域内的溶液能够被单独收集。7.根据权利要求6所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽包括槽体、阳极、阴极和电泳区域；电泳区域由固定分隔或可操作性分隔隔开的两个区域组成，阳极和阴极分别位于这两个区域中。8.根据权利要求6所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽包括槽体、阳极、阴极和电泳区域；电泳区域包括两个独立的区域，所述独立的区域经电泳通道连接，电泳通道中带有固定分隔或可操作性分隔；阳极和阴极分别位于这两个区域内。9.根据权利要求1所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽包括三个固定分隔的或可操作性分隔的电泳区域，在不影响大分子正常电泳行为的情况下，这些分隔使不同电泳区域内的溶液能够被单独收集；阳极和阴极分别位于两端的区域内。10.权利要求6或9所述的核酸分离方法，其特征在于所述电泳槽还包括选择性核酸分离部件。2CN102836423A说明书1/18页一种核酸分离方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种核酸的分离方法、装置及其应用，进一步的，本发明涉及在疫苗制品中去除宿主细胞核酸残留及检测残留的宿主核酸含量的方法、装置及其应用。背景技术[0002]预防接种传统上是针对传染病综合性预防的重要措施之一，疫苗的免疫效果和安全性备受关注。目前包括重组(CHO细胞)乙肝疫苗和Vero细胞狂犬病疫苗在内的很多疫苗都是细胞培养疫苗，在疫苗的生产过程中不可避免地混入了宿主细胞核酸的污染。如果用混有宿主细胞核酸的蛋白疫苗免疫人体，将有可能产生不可预料的后果，可能造成受体基因的插入突变，导致抑癌基因失活后癌基因被激活等严重后果。[0003]考虑到这些潜在的风险，国际以及各国的医疗卫生机构都对疫苗制品中DNA的残留制定了相关标准。1986年世界卫生组织规定，用细胞系生产的疫苗每支DNA的残留不能超过100pg，而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10pg，目前我国按照世卫组织的标准，规定每支疫苗的DNA残留不能超过100pg。这些严格的质量标准使得去除疫苗中的DNA成为生产过程中的一个关键的技术瓶颈。[0004]制备病毒疫苗的传统工艺是采用超滤浓缩、分子筛层析纯化等手段进行纯化，缺陷是制备的疫苗中宿主DNA的残留量较高。为了克服这个缺陷，有的研究人员通过改变超滤浓缩的倍数和层析柱的连接方式，降低宿主DNA的残留量。去除宿主细胞DNA残留的另一种方法是采用DNA酶处理。欧洲专利0870508和美国专利5948410披露了这种类型的常规方法。其涉及两步处理，首先用DNA酶(例如，Benzonase