一种寡聚核酸分子及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103571827103571827A(43)申请公布日2014.02.12(21)申请号201210249947.7(22)申请日2012.07.19(71)申请人杜权地址100038北京市海淀区复兴路甲一号院19-3-602(72)发明人杜权(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12N15/10(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书25页说明书25页序列表6页序列表6页附图1页附图1页(54)发明名称一种寡聚核酸分子及其应用(57)摘要本发明提供了一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，所述寡聚核酸分子一方面可由两个核酸片段连接而成，其中第一核酸片段为一发夹结构的通用序列，该序列的5’末端被磷酸化，3’末端的部分序列与第二核酸片段的3’末端的部分序列互补，第一核酸片段与一种可筛选标记物连接；第二核酸片段包括两个核酸序列区域，其5’端区域与待分离的小分子RNA序列完全或部分互补，3’端区域与第一片段的3’端部分序列完全或部分互补；另一方面，所述寡聚核酸分子为一条包含以上序列特征的直接合成的核酸片段。进一步的，本发明提供了使用上述寡聚核酸分子分离小分子RNA的方法、以及使用上述寡聚核酸分子和方法纯化小分子RNA的试剂盒。CN103571827ACN1035782ACN103571827A权利要求书1/1页1.一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由连续的两段核酸序列构成，其中第一核酸序列为一发夹结构的通用序列，其3’端区域与第二核酸序列的3’端区域完全或部分互补；第二核酸序列由5’端区域和3’端区域组成，其5’端区域与待分离的小分子RNA序列完全或部分互补，其3’端区域与第一片段的3’端区域完全或部分互补。2.一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由连续的两段核酸序列构成，其中第一核酸序列为一发夹结构的通用序列，其3’端区域与第二核酸序列的3’端区域完全或部分互补，第一核酸序列与一种可筛选标记物连接，可筛选标记物可标记在寡聚核酸分子的中间位置或末端位置；第二核酸序列由5’端区域和3’端区域组成，其5’端区域与待分离的小分子RNA序列完全或部分互补，其3’端区域与第一片段的3’端区域完全或部分互补。3.权利要求1-2任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子为包含至少一个核糖核苷酸(RNA)分子的杂合分子。4.权利要求1-3任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端区域和3’端区域之间无间隔序列。5.权利要求1-3任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端区域和3’端区域之间包含至少一个碱基的间隔序列。6.权利要求1-5任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子为包含化学修饰的寡聚核酸分子，所述修饰为如下的修饰中的至少一种：(1)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修饰；(1)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；(3)对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中碱基的修饰。7.权利要求6所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修饰为对所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH的修饰。8.权利要求6-7任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修饰为所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’-OH被甲氧基或氟取代。9.权利要求1-8任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子中包含至少一个锁核酸(LNA)分子。10.权利要求2所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述可筛选标记物选自生物素、地高辛或特异性核酸序列。2CN103571827A说明书1/25页一种寡聚核酸分子及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种用于小分子RNA分离的寡聚核酸分子、利用该寡聚核酸分子分离小分子RNA的方法及用于该方法的试剂盒。背景技术[0002]目前，小分子RNA-100个核苷酸或更小的RNA分子是极为引人关注的领域，并且在分子治疗领域很有前途。这些小分子RNA主要包括微小RNA分子(microRNA，简写做miRNA)和小干扰RNA分子(smallinterferingRNA，简写做siRNA)，由于这两种RNA分子都能够与靶mRNA杂交，所以能够调节基因表达。在不同的组织、器官和不同的发育时期，miRNA和/或siRNA的表达是不同的，它们可能在各种生物发育、生理活动、疾病发生过程中起重要的调节作用。这些小分子RNA的错误表达会导致肿瘤、自身免疫性疾病等的发生。因此，对这些小分子RNA的研究，尤其是对它们的定量研究将对它们的生物功能的研究起到重要推动作用。