检测CYP2D6基因的试剂、检测方法和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112501265A(43)申请公布日2021.03.16(21)申请号202011020314.X(22)申请日2020.09.24(71)申请人杭州百迈生物股份有限公司地址311228浙江省杭州市大江东产业聚集区临江高新区纬五路3688号科创园2幢4楼(72)发明人刘汉仁丁佳女(51)Int.Cl.C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书9页序列表6页附图3页(54)发明名称检测CYP2D6基因的试剂、检测方法和试剂盒(57)摘要本发明涉及一种CYP2D6基因分型检测试剂盒，该检测试剂盒包括CYP2D6*10的检测引物和探针，以及内参基因ALB的检测引物和探针。本发明利用CYP2D6和内参(ALB)两个基因的扩增即可区分CYP2D6*10和CYP2D6*5两种型别。为临床用药指导提供了一个简捷判断的新途径。CN112501265ACN112501265A权利要求书1/2页1.一种CYP2D6基因分型检测试剂盒，包括检测CYP2D6*10的引物和探针。2.根据权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6*10引物和探针的序列分别为：CYP2D6*10上游引物：5’‑CCATTTGGTAGTGAGGCAGGT‑3’CYP2D6*10下游引物：5’‑ATGCAGCAGGTTGCCCA‑3’CYP2D6*10野生型探针：5’‑CACGCTACCCACCAGG‑3’CYP2D6*10突变型探针：5’‑ACGCTACTCACCAGG‑3’。3.根据权利要求1至2之一所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括检测内参基因ALB引物和探针序列，分别为：ALB上游引物：5’‑TTGTGGGCTGTAATCATCGTCTA‑3’ALB下游引物：5’‑GTTCTCTTTCACTGACATCTGCAAA‑3’ALB探针：5’‑CCCACACAAATCTCTCCCTGGCATTG‑3’。4.根据权利要求1至3之一所述的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2D6*10野生型探针、CYP2D6*10突变型探针、ALB探针分别用不同的荧光信号基团进行标记。5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，CYP2D6*10野生型探针：FAM‑CACGCTACCCACCAGG‑MGBNFQCYP2D6*10突变型探针：VIC‑ACGCTACTCACCAGG‑MGBNFQ。ALB探针：CY5‑CCCACACAAATCTCTCCCTGGCATTG‑BHQ3。6.一种CYP2D6基因多态性的检测方法。包括以下步骤：(1)提取样品中的基因组DNA；(2)步骤1获得的DNA进行荧光定量PCR，PCR反应试剂包括检测CYP2D6*10的引物和探针，以及检测内参基因ALB的引物和探针；(3)结果判读：若CY5、FAM有信号，则为CYP2D6*1野生型；若CY5、VIC有信号，则为CYP2D6*10纯合突变型；若CY5、FAM、VIC有信号，则为CYP2D6*1/*10杂合突变型；若只有CY5有信号，则为CYP2D6*5型。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述检测CYP2D6*10引物和探针的序列分别为：CYP2D6*10上游引物：5’‑CCATTTGGTAGTGAGGCAGGT‑3’CYP2D6*10下游引物：5’‑ATGCAGCAGGTTGCCCA‑3’CYP2D6*10野生型探针：FAM‑CACGCTACCCACCAGG‑MGBNFQCYP2D6*10突变型探针：VIC‑ACGCTACTCACCAGG‑MGBNFQ检测内参基因ALB引物和探针序列分别为：ALB上游引物：5’‑TTGTGGGCTGTAATCATCGTCTA‑3’ALB下游引物：5’‑GTTCTCTTTCACTGACATCTGCAAA‑3’ALB探针：CY5‑CCCACACAAATCTCTCCCTGGCATTG‑BHQ3。8.一种能判断CYP2D6基因突变型和缺失型的试剂组合物，包括荧光定量PCR扩增试剂，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增试剂包括检测CYP2D6*10引物和探针、检测内参基因ALB引物和探针，其中，检测CYP2D6*10引物和探针的序列分别为：2CN112501265A权利要求书2/2页CYP2D6*10上游引物：5’‑CCATTTGGTAGTGAGGCAGGT‑3’CYP2D6*10下游引物：5’‑ATGCAGCAGGTTGCCCA‑3’CYP2D6*10野生型探针：FAM‑CACGCTACCCACCAGG‑MGBNFQCYP2D6*10突变型探针：VIC‑ACGCTACTCACCAGG‑MGBNFQ检测内参基因ALB引物和探针序列分别为：