转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116004890A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211241000.1(22)申请日2022.10.11(71)申请人广州双螺旋基因技术有限公司地址510000广东省广州市黄埔区国际生物岛螺旋四路7号第三层302单元申请人广西-东盟食品检验检测中心(72)发明人张璜韦涛余嘉明黄惠琳李鑫高金艳林雪金郭秋霞(74)专利代理机构广州凯东知识产权代理有限公司44259专利代理师曾志环(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/686(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法(57)摘要本发明公开了转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法，试剂包括所述引物组、PCRbuffer、TaqDNA聚合酶、UDG酶，试剂盒包括试剂、空白对照、阳性对照，检测方法步骤包括：提取待测样品核酸、构建反应体系，按反应程序进行反应，结果判读。本发明优点包括：具有较高的特异性和灵敏度、检测结果准确可靠。CN116004890ACN116004890A权利要求书1/1页1.转基因油菜品系MS11检测用的引物组，其特征在于：包括：正向引物MS11‑F，其序列如SEQIDNO.1所示；反向引物MS11‑R，其序列如SEQIDNO.2所示；探针MS11‑P，其序列如SEQIDNO.3所示；所述探针5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团。2.根据权利要求1所述的转基因油菜品系MS11检测用的引物组，其特征在于：所述探针5’端修饰有FAM基团，3’端修饰有MGB基团。3.转基因油菜品系MS11检测用的试剂，其特征在于：包括权利要求1或2所述引物组、PCRbuffer、TaqDNA聚合酶、UDG酶。4.转基因油菜品系MS11检测用的试剂盒，其特征在于：包括权利要求3所述试剂、空白对照、阳性对照。5.根据权利要求4所述的转基因油菜品系MS11检测用的试剂盒，其特征在于：所述空白对照是超纯水；所述阳性对照是含有靶标序列的重组质粒，所述阳性对照的重组质粒浓度为10‑100pg/μL。6.根据权利要求5所述的转基因油菜品系MS11检测用的试剂盒，其特征在于：所述重组质粒是由靶标序列插入含有Ampicillin抗性的载体上制得，靶标序列如SEQIDNO.4所示。7.转基因油菜品系MS11检测用的反应体系，其特征在于：所述反应体系共25μL，成分包括PCRBuffer、0.04～0.06U/μLTaqDNA聚合酶、0.01～0.04U/μLUDG酶、0.2～0.6μM权利要求1所述的正向引物、0.2～0.6μM权利要求1所述的反向引物、0.05～0.3μM权利要求1或2所述的探针，待测核酸添加体积5μL，余量为超纯水。8.根据权利要求7所述的转基因油菜品系MS11检测用的反应体系，其特征在于：所述PCRBuffer成分包括45～55mmol/LKCl、8～12mmol/LTris‑HCl、1.4～1.6mmol/LMgCl2、90～110μg/mL牛血清白蛋白、dNTP各190～210μmol/L。9.根据权利要求7‑8任一所述的转基因油菜品系MS11检测用的反应体系，其特征在于：所述待测核酸10～50ng/μL。10.一种应用如权利要求7‑9任一所述的反应体系的转基因油菜品系MS11检测方法，其特征在于：步骤包括：(1)提取待测样品核酸；(2)构建反应体系；(3)加入阳性对照、空白对照及待测样品核酸后，在实时荧光定量PCR仪上按如下程序进行PCR反应：去污染，37℃，10分钟，1个循环；预变性，95℃，5分钟，1个循环；扩增，95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环；荧光采集；(4)根据扩增曲线及Ct值判断待测样品核酸是否含有转基因油菜MS11成分。2CN116004890A说明书1/5页转基因油菜品系MS11检测用的试剂、试剂盒和检测方法技术领域[0001]本发明涉及转基因食品安全检测技术领域，尤其涉及转基因油菜品系的检测技术。背景技术[0002]转基因技术是世界上应用最为迅速的作物育种技术。1995年转基因作物商业化种植面积约170万公顷，但到了2015年，全球增加到1.797亿公顷，增长了将近100倍，相关收益超过了约1500亿美元。从1996年始，转基因作物在全球商业化应用，至2015年已有26种转基因作物共363项转化体获准商业化种植或环境释放。转基因技术本身蕴含的巨大应用潜力和无限商机，吸引各国高度重视和瞩目。和转基因商业潜力一样瞩目的，是转基因作物及相关产品带来的食品安全已知及潜在风险。从2006年以来