应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒及方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114814243A(43)申请公布日2022.07.29(21)申请号202210707753.0(22)申请日2022.06.22(71)申请人北京芯迈微生物技术有限公司地址101299北京市平谷区中关村科技园区平谷园兴谷A区7号-21032(集群注册)(72)发明人谭欣李雪于洋孙瑗敏张蓓李会强杨赣英叶涛(74)专利代理机构北京天奇智新知识产权代理有限公司11340专利代理师龙涛(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒及方法(57)摘要本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，提出一种应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒，所述试剂盒通过选用高亲和力的捕获抗体和低亲和力的捕获抗体沿样本的流动方向依次设置，依据靶分析物的含量多少，不同亲和力的抗体发挥主要作用，在确保功能灵敏度的同时，拓宽了检测范围，实现对浓度范围跨度较大的蛋白质抗原水平的准确定量，减少不必要的稀释。CN114814243ACN114814243A权利要求书1/1页1.一种应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒，包括载体，其特征在于，所述载体上沿样本流动方向依次设置有低浓度检测区和高浓度检测区，低浓度检测区和高浓度检测区能够基于靶分析物的存在或不存在产生不同强度的信号，其中低浓度检测区包被有捕获抗体A，高浓度检测区包被有捕获抗体B，捕获抗体A针对靶分析物的亲和力高于捕获抗体B针对靶分析物的亲和力。2.根据权利要求1所述的应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒，其特征在于，所述信号抗体为被荧光微球标记的抗体。3.根据权利要求1所述的应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒，其特征在于，所述载体为微流控芯片，捕获抗体A和捕获抗体B沿样本流动方向依次包被在微通道内形成低浓度检测区和高浓度检测区，信号抗体设置在微通道内位于捕获抗体A的前端形成标记区或直接设置在微流控芯片的加样孔内。4.根据权利要求3所述的应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒，其特征在于，所述微通道内沿样本的流动方向依次设有标记区、低浓度检测区、高浓度检测区以及质控位点。5.一种定量检测蛋白质抗原的方法，其特征在于，应用权利要求1‑4中任一试剂盒进行检测，包括至少以下步骤：1）获取校准函数;2)将可能包含靶分析物的样品首先与标记抗体结合，依次流经载体的低浓度检测区和高浓度检测区，反应结束后利用检测仪器获取低浓度检测区和/或高浓度检测区的信号值；3）与校准函数比较确定靶分析物的浓度：当仅有低浓度检测区检测到信号值时，以校准函数T1为标准比较低浓度检测区的信号值确定靶分析物的浓度，当低浓度检测区和高浓度检测区均检测到信号时，以校准函数T2为标准比较高浓度检测区的信号值确定靶分析物的浓度。2CN114814243A说明书1/4页应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒及方法技术领域[0001]本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，特别涉及一种应用于蛋白质抗原的定量检测试剂盒及方法。背景技术[0002]临床上常采用免疫分析方法对蛋白质抗原进行定量检测，检测模式为双抗体夹心法。双抗体夹心法中配对的两株抗体的亲和力是决定分析敏感度和检测范围的关键因素。信号抗体与包被抗体配对的亲和力差异，可决定待检抗原低区的灵敏度和准确度。若使用高亲和力的捕获抗体可以提升检测的敏感度，但容易产生钩状效应，检测上限降低；而使用低亲和力的捕获抗体可以拓宽检测方法的检测上限，但检测敏感度低。而一些特殊的蛋白质抗原IGE、CEA、HCG、AFP、HBs等对功能灵敏度和检测范围均有很高的要求。[0003]IgE是一种分泌型免疫球蛋白，在正常人血清中的含量很低（低于总血清免疫球蛋白含量的0.001%）。体内IgE浓度与年龄有关，新生儿含量最低，随年龄逐渐增高，5‑7岁达到稳定水平，但10‑15岁人群中IgE含量达到最高。IgE主要由鼻咽、扁桃体、支气管等处固有层的浆细胞产生，为亲细胞性抗体，能与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面IgE受体结合，从而导致机体处于致敏状态。IgE是介导Ⅰ型超敏反应的主要抗体，血清中IgE的浓度通常与在过敏原中的暴露强度和过敏症状的严重程度有关。血清IgE含量测定常被用于过敏性疾病（如哮喘、枯草热、特异性皮炎和荨麻疹）的鉴别诊断和治疗疗效监测，可区分特异反应性和非特异反应性的过敏症状患者。此外，在儿童期，准确测量血清中IgE的浓度对于就过敏性症状做出预见性评估具有非常重要的意义。目前的主流检测方法血清未再次稀释时检测范围上限最高为2500IU/ml，对于超出检测上限的高水平tIgE的测定需将标本稀释后再行测定，增加了检验人员的工作量