一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115436639A(43)申请公布日2022.12.06(21)申请号202210887358.5(22)申请日2022.07.26(71)申请人深圳市帝迈生物技术有限公司地址518000广东省深圳市光明区玉塘街道田寮社区光侨路高科创新中心B座10层(72)发明人夏琳(74)专利代理机构深圳市瑞方达知识产权事务所(普通合伙)44314专利代理师王少虹(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书3页说明书17页附图2页(54)发明名称一种定量检测D-二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种定量检测D‑二聚体的免疫荧光层析试剂盒及其制备方法，试剂盒包括试纸条和壳体；试纸条包括PVC底板，在PVC底板的板面上沿其长度方向顺次设有样本垫、过滤膜、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维膜上依次设有第一定量带、第二定量带、质控带；壳体上依次设有加样口、观察窗和条形码；制备方法：将荧光微球活化并与抗体偶联，稀释抗体标记的荧光微球标记物并喷涂于标记垫上，稀释抗体并喷涂制成定量带和质控带，在PVC底板上依次粘贴硝酸纤维素膜、标记垫、过滤膜、样本垫和吸水垫，并组装在壳体中，将其干燥后密封。本发明线性范围广，准确度高，重复性好，临床相关性好；制备方法生产成本低，可用于工业化生产。CN115436639ACN115436639A权利要求书1/3页1.一种定量检测D‑二聚体的免疫荧光层析试剂盒，其特征在于，包括试纸条和壳体；所述试纸条包括PVC底板(11)，在所述PVC底板(11)的板面上沿其长度方向顺次设有样本垫(12)、过滤膜(13)、标记垫(14)、硝酸纤维素膜(15)和吸水垫(16)；所述硝酸纤维素膜(15)上由所述标记垫(14)向所述吸水垫(16)一侧依次设有第一定量带(151)、第二定量带(152)、质控带(153)，且所述第一定量带(151)、所述第二定量带(152)和所述质控带(153)沿所述硝酸纤维素膜(15)的长度方向等距布置；所述壳体上依次设有加样口(21)、观察窗(22)和条形码(23)；所述PVC底板(11)和所述硝酸纤维素膜(15)具有低荧光特性；所述标记垫(14)含有D‑二聚体捕获抗体标记的荧光微球标记物和山羊抗鸡单克隆抗体标记的荧光微球标记物；所述第一定量带(151)和所述第二定量带(152)均包被D‑二聚体检测抗体；所述质控带(153)包被鸡IgY抗体；所述荧光微球的发射波长为400～500nm，且其粒径为50～150nm。2.一种定量检测D‑二聚体的免疫荧光层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将荧光微球活化；S2、将活化的荧光微球分别与抗体A和抗体B进行偶联，加入封闭液反应，加入储存液避光保存，得到抗体A标记的荧光微球标记物和抗体B标记的荧光微球标记物；所述抗体A为D‑二聚体捕获抗体，所述抗体B为山羊抗鸡单克隆抗体；S3、用稀释液将S1步骤所得的抗体A标记的荧光微球标记物和抗体B标记的荧光微球标记物分别稀释，再混合，将其均匀喷涂于标记垫上，干燥保存；S4、稀释抗体C和抗体D，将稀释后的抗体C喷涂在硝酸纤维素膜上制成第一定量带和第二定量带，稀释后的抗体D喷涂在硝酸纤维素膜上制成质控带，将所述硝酸纤维素膜恒温干燥并装袋；所述抗体C为D‑二聚体检测抗体，所述抗体D为鸡IgY抗体；S5、在PVC底板上依次粘贴所述硝酸纤维素膜、标记垫、过滤膜、样本垫和吸水垫，所述样本垫、所述过滤膜、所述标记垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫沿所述PVC底板长度方向的首尾之间至少部分互相搭接，然后切割成试纸条并组装在壳体中，将其干燥后密封。3.根据权利要求2所述的定量检测D‑二聚体的免疫荧光层析试剂盒的制备方法，其特征在于，所述S1步骤包括以下子步骤：S1.1、将荧光微球超声重悬，加入MES活化缓冲液中，离心并弃去上清液，得到第一荧光微球；荧光微球和MES活化缓冲液的体积比为1:(7～11)；S1.2、将S1.1步骤所得的第一荧光微球用MES活化缓冲液洗涤2～4次，得到第二荧光微球；第一荧光微球和MES活化缓冲液的体积比为1:(8～12)；S1.3、在S1.2步骤所得的第二荧光微球中加入MES活化缓冲液、EDC溶液和NHS溶液，MES活化缓冲液：EDC溶液：NHS溶液的体积比为(37～39):1:1，震荡并弃去上清液，得到第三荧光微球；S1.4、将S1.3步骤所得的第三荧光微球用Tris‑HCl缓冲液洗涤2～4次，超声重悬至200～300μL；第三荧光微球和Tris‑HCl缓冲液的体积比为1:(8～12