一种D二聚体检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102788878A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102788878A(43)申请公布日2012.11.21(21)申请号201210290874.6(22)申请日2012.08.16(71)申请人北京恩济和生物科技有限公司地址100083北京市海淀区学清路16号学知轩1801室(72)发明人谢兵(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种D二聚体检测试剂盒及其制备方法(57)摘要一种D二聚体的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有D二聚体单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长570nm处吸光度变化的速度，从而测算出D二聚体的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。CN10278ACN102788878A权利要求书1/1页1.一种D二聚体检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：a、试剂R1包括：200-220mmol/LTris缓冲液、5-10mmol/L聚乙二醇、1-5mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；b、试剂R2：200-220mmol/LTris缓冲液、结合有D二聚体单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的D二聚体单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为：10.5mg/ml的D二聚体单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/LTris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/LTris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3mmol/L叠氮钠。3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：（a）按下列比例配制好试剂：试剂R1：Tris缓冲液200-220mmol/L聚乙二醇5-10mmol/L叠氮钠1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L试剂R2：Tris缓冲液200-220mmol/L结合有D二聚体单克隆抗体的乳胶粒子3.5-5%（v/v）吐温-201-5mmol/L叠氮钠0.5-3mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中D二聚体的浓度。4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1：25到1：35之间。5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为8分钟。7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的波长为570nm。2CN102788878A说明书1/3页一种D二聚体检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人D二聚体的检测试剂盒。背景技术[0002]纤维蛋白溶解系统是人体最重要的抗凝系统。当纤维蛋白凝结块形成时，纤维蛋白溶解过程开始,并将纤维蛋白凝结块溶解形成各种可溶片段,D二聚体即是其中最重要的可溶性片段之一。[0003]人体纤溶系统，它对保持血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。D二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程。溶栓治疗是指用药物来活化纤维蛋白溶解系统。一般为投入一种纤溶酶原活化物如尿液酶、链激酶或组织型纤溶酶原活化物，使大量纤溶酶生成，从而加速已形成血栓的溶解。D二聚体生成，则表明达到溶栓效果。[0004]纤溶蛋白降解产物中，唯D二聚体交联碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。因此,理论上，D二聚体的定量检测可定量反映药物的溶栓效果、及可用于诊断、筛选新形成的血栓。[0005]D二聚体是测定纤溶系统主要因子，对于诊断与治疗纤溶系统疾病及与纤溶系统有关疾病以及溶栓治疗监测,有着重要的意义。D二聚体是深静脉血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，弥漫性血管内凝血(DIC)的关键指标。[0006]自从1971年Wilson等首先将纤维蛋白降解产物用于临床诊断以来，D二聚体的检测在诊断肺动脉栓塞方面发挥了巨大的作用，随着研究的开展和深入，临床工作者对D二聚体的意义认识日益深刻。[0007]D二聚体测定方法很多，包括：(一)放射免