一种同时测定清肺药物中多种活性成分的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112147243A(43)申请公布日2020.12.29(21)申请号202010874625.6(22)申请日2020.08.26(71)申请人浙江省人民医院地址310014浙江省杭州市上塘路158号(72)发明人黄萍张轶雯朱俊峰刘宇佳潘宗富盛孔胜(74)专利代理机构杭州恒翌专利代理事务所(特殊普通合伙)33298代理人王从友(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书10页附图2页(54)发明名称一种同时测定清肺药物中多种活性成分的检测方法(57)摘要本发明公开了同时测定清肺药物中绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素含量的HPLC方法，以及检测贝母素甲、贝母素乙的方法，建立了药物活性成分的指纹图谱，保证了测量方法的精密度、稳定性、重复性、专属性、准确度。CN112147243ACN112147243A权利要求书1/2页1.一种清肺药物组合物的含量测定方法，该组合物中含有如下药物：龙葵，百合，夏枯草，浙贝母，重楼，制黄精，沙参，半枝莲和白花蛇舌草，其特征在于对药物中活性成分绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素同时进行检测，包括如下步骤：S1.色谱条件：采用SB-C18色谱柱；流动相A为0.3%质量浓度的甲酸溶液，流动性B为乙腈，梯度洗脱，检测波长：0-25min为310nm，25-75min为330nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μl；S2.对照品溶液制备：精密称定咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制得对照品溶液；S3.供试品溶液制备：取龙葵，百合，夏枯草，浙贝母，重楼，制黄精，沙参，半枝莲和白花蛇舌草原料药，置于蒸馏瓶中，加水后恒温回流提取，过滤得滤液，滤渣加水第二次回流，过滤得滤液，合并两次滤液，旋转蒸发即得；S4.测定：在色谱条件下，分别进对照品溶液、供试品溶液各10μl，以峰面积计算样品含量。2.权利要求1所述的测定方法，其特征在于，S1色谱条件中的梯度洗脱为（以B的体积百分比计）0-18min：8-12%B，18-25min：12%-14%B；25-27min：14%-16%B；27-40min：16%-16%B；40-75min：16%-35%B。3.权利要求1所述的测定方法，其特征在于对照品制备步骤如下：精密称定咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制得浓度分别为0.874mg/ml，1.18mg/ml，0.626mg/ml，0.571mg/ml，0.467mg/ml，0.238mg/ml的绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品贮备液，4℃冰箱贮藏，备用。4.权利要求1所述的测定方法，其特征在于供试品溶液的制备包括：取浙贝12g，白花蛇舌草15g，龙葵15g，重楼5g，半枝莲15g，沙参12g，夏枯草8g，百合15g，制黄精15g，置于蒸馏瓶中，加入10倍量(1120ml)的水，180℃恒温回流提取2小时，过滤得滤液，药渣加入10倍量水第二次180℃恒温回流2小时，过滤得滤液，合并两次滤液旋转蒸发到体积为1120ml，即得。5.权利要求1所述的测定方法，其特征在于绿原酸、咖啡酸、对香豆酸在310nm处有最大吸收，野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素在330nm处有最大吸收；供试品各成分峰面积RSD均在4%之内。6.清肺药物组合物中活性成分HPLC标准指纹图谱的建立方法，其特征在于建立活性成分为绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸和芹菜素的指纹图谱，用SB-C18色谱柱(4.6*150mm，5μm)，乙腈-0.3%甲酸体系，进行梯度洗脱，流动相A为0.3%质量百分比的甲酸，流动性B为乙腈，梯度洗脱（以B的体积百分比计）0-18min：8-12%B，18-25min：12%-14%B；25-27min：14%-16%B；27-40min：16%-16%B；40-75min：16%-35%B；检测波长：0-25min为310nm，25-75min为330nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μl；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录80min内的色谱图，使用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得。7.权利要求6所述的方法，其特征在于对照品制备步骤如下：精密称定咖啡酸、对香豆酸、野黄芩苷、迷迭香酸、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制得浓度分别为0.874mg/ml，1.18mg/ml，0.626mg/ml，