一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113564077A(43)申请公布日2021.10.29(21)申请号202110857127.5A61P31/04(2006.01)(22)申请日2021.07.28C12R1/01(2006.01)(71)申请人华侨大学地址362000福建省泉州市丰泽区城东城华北路269号(72)发明人陈明霞赵炎何小玉叶晓声(74)专利代理机构厦门市首创君合专利事务所有限公司35204代理人张松亭陈丹艳(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N1/04(2006.01)A61K35/74(2015.01)A61P1/10(2006.01)A61P1/12(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图4页(54)发明名称一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂及其制备方法和应用。本发明以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)为猎物宿主、以海水或人工海水为培养基的食弧菌嗜盐噬菌弧菌(Halobacteriovoraxvibrionivorans)菌剂快速、简便、安全且低成本的生产方法。所选宿主无环境风险，可在48h内快速完成整个生产过程，液体菌剂可在常温下保藏12个月以上，菌剂在南美白对虾养殖中促进对虾的生长，降低对虾肠道内弧菌的含量，保持对虾肠道内微生态平衡。CN113564077ACN113564077A权利要求书1/1页1.一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂的制备方法，其特征在于：在含有枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)宿主菌的培养基中接入食弧菌嗜盐噬菌弧菌(Halobacteriovoraxvibrionivorans)，于20～35℃培养24h，再次添加宿主，继续培养0.5‑1h，添加0.5‑3g/L的菌种保护剂，混匀分装，即得食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂。2.根据权利要求1所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述培养基中含有108‑10cfu/mL的枯草芽胞杆菌宿主菌。3.根据权利要求1所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂的制备方法，其特征在于：接入105pfu/mL的食弧菌嗜盐噬菌弧菌。4.根据权利要求1所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述菌种保护剂为灭菌黄原胶，其添加终浓度为0.05‑0.3％w/v。5.根据权利要求1所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂的制备方法，其特征在于：所述培养基包括海水或人工海水；其中人工海水的组分为10‑20g/LNaCl或海盐、0.04‑1.2g/LCa2+、0.39‑1.56g/LK+和0.24‑2.16g/LMg2+，余量为蒸馏水或自来水。6.一种如权利要求1‑5中任一项所述方法制备而成食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂。7.根据权利要求6所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂，其特征在于：活菌量为108‑9pfu/mL，且常温避光保藏12个月，活菌量不低于105pfu/mL。8.如权利要求6所述的一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂在南美白对虾养殖中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：用于调整水体和肠道弧菌的菌群结构。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述调整水体和肠道弧菌包括溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、霍乱弧菌(V.cholerae)、欧文斯氏弧菌(V.owensii)、强壮弧菌(V.fortis)、变异弧菌(V.variabilis)、轮虫弧菌(V.rotiferianus)、黑鳍翅鲨弧菌(V.hyugaensis)、日本弧菌(V.japonicus)、桥状弧菌(V.ponticus)、塔氏弧菌(V.tubiashii)、远青弧菌(V.azureus)。2CN113564077A说明书1/8页一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物技术技术领域，具体涉及一种食弧菌嗜盐噬菌弧菌菌剂及其制备方法，以及在南美白对虾养殖中的应用。背景技术[0002]蛭弧菌类群(Bdellovibrio‑and‑likeorganisms，BALOs)指的是一类具有攻击、裂解大型细菌(主要为革兰氏阴性细菌)的小型专性捕食寄生性革兰氏阴性细菌，有类似噬菌体的作用，广泛存在于各类环境中，如水体、沉积物、根系、土壤、动物皮肤表面或肠道等。该类细菌所具有的独特“寄生”和“噬菌”生物特性被微生物界学者所关注，在水产养殖、净化水体、农业和畜禽业等方面也具有广阔的应用前景。[0003]在水产养殖业中，BALOs可作为“活性抗生素”，在净化水体和消除病原体等方面具有巨大的应用前景。李怡等(2008)研究发现噬菌蛭弧菌(B.bacteriov