有机磷农药胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制.pdf

上海师范大学硕士学位论文有机磷农药胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制姓名：刘莹申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：魏新林20090401上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：有机磷农药胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制学科专业：生物化学与分子生物学学位申请人：刘莹指导教师：魏新林（副教授）摘要有机磷农药目前仍在世界范围内广泛使用其检出率高、超标严重、毒性大对消费者的身体健康造成了极大的危害。加大有机磷农药的监控力度开发快速检测技术成为有机磷农药残留检测的研究趋势是事关国计民生的重大食品安全问题。本研究基于免疫分析原理利用胶体金标记技术研制了一种胶体金免疫层析试纸条为有机磷农药的现场监控提供了可能并为农药小分子的胶体金免疫层析试纸条的制作提供了理论依据。本实验的主要研究内容和结果如下：1通过重氮化法合成了一种有机磷人工抗原。先将合成的有机磷半抗原产物通过质谱分析和核磁共振鉴定确定半抗原合成成功。偶联后的全抗原经紫外扫描和红外光谱鉴定确定半抗原与载体蛋白偶联成功。经浓度测定有机磷人工抗原产物的蛋白含量为4.32mg/ml。通过紫外吸收法测得半抗原和载体蛋白的偶联比为7.61：1。2制备了有机磷单克隆抗体胶体金标记探针确定胶体金标记的最佳pH为8.0最适蛋白量为24µg/ml。通过斑点金免疫渗滤实验和免疫层析实验鉴定制备的金标抗体探针具有免疫活性。3以有机磷人工合成抗原为包被抗原固定于硝酸纤维素膜的检测线位置以羊抗鼠IgG包被于硝酸纤维素膜的控制线位置组装了胶体金免疫层析试纸条。对试纸条的各个组分进行了研究确定了硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫等膜材料的使用型号对各种膜的浸泡处理液的配方进行了优化选择对免疫层析反应的溶液系统进行了筛选并对包被抗原、羊抗鼠二抗及金标抗体的浓度和喷量进行了调试和确定。最后对制备的胶体金试纸条进行了灵敏度、特异性、稳定性和重复性等各项质量性能指标测试。结果表明该胶体金试纸条可检出杀螟硫磷、甲基对硫磷、对硫磷等9种有机磷农药最低检出浓度可达0.25mg/kg可用于多种有机磷农药的初筛。关键词：有机磷农药残留检测胶体金免疫层析试纸条I上海师范大学硕士学位论文摘要AbstractOrganicphosphoruspesticides(OPs)arestillbeingwidelyusedallovertheworldwhichhaveareallyhighresiduedetectionandover-standardrateinfruitsvegetablesandtea.TheextremelyharmfultoxicityofOPsresiduesremainedinfoodhasposedagreatthreattoconsumers.ThereforeitissignificanttostrengthenOPssupervisionandtodeveloparapidresiduedetectionmethodtoensurefoodsafety.InthisstudyweusedColloidalGoldImmunochromatographicAssay(GICA)anddevelopedacolloidalgoldstrip