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细粒棘球蚴胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制与初步应用
摘要
棘球蚴病是一种严重的人畜共患疾病。为了提高棘球蚴病的诊断和治疗效果，本研究开发了一种基于细粒棘球蚴胶体金免疫层析技术的快速检测试纸条。该测试纸条能够对细粒棘球蚴病进行快速、准确的诊断，具有简便、快速、低成本等优点，具有广泛的应用前景。
关键词：棘球蚴病；胶体金；免疫层析；快速检测试纸条；诊断
Abstract
Toimprovethediagnosisandtreatmentofcysticercosis,aseriouszoonoticdisease,wedevelopedarapiddiagnosticteststripbasedonthecolloidalgoldimmunochromatographytechnologyforthedetectionofTaeniasaginata.Theteststriphastheadvantagesofsimplicity,rapidity,andlowcost,andissuitableforuseinresource-limitedareaswheretraditionaldiagnosticmethodsarenotavailable.Theresultsoftheinitialtrialsarepromising,andthisdiagnosticteststriphasawiderangeofpotentialapplications.
Keywords:Taeniasaginata;colloidalgold;immunochromatography;rapiddiagnosticteststrip;diagnosis
引言
棘球蚴病是一种由细粒棘球蚴引起的人畜共患疾病，具有全球分布，在许多国家都是一种普遍的寄生虫感染病。该疾病的临床表现复杂，包括头痛、眼部浮动物、肌肉疼痛、癫痫、局限性神经功能障碍等症状。尽管已经有了一些有效的治疗方法，但由于传统的病原学诊断方法费用高、操作繁琐，难以普及开展，导致该病的有效预防和治疗受到了严重的影响。
为了提高棘球蚴病的诊断和治疗效果，人们研发了一系列基于免疫学和分子生物学技术的检测方法。这些技术具有高度灵敏度、快速性和准确性等优点，已经广泛应用于诊断实践中。然而，其中大部分技术仍然需要使用昂贵的仪器设备和复杂的操作步骤，不适合用于资源缺乏的地区，而且需要一定的培训和技能才能使用。
为此，我们开发了一种基于细粒棘球蚴胶体金免疫层析技术的快速检测试纸条。该方法具有简便、快速、低成本等许多优点，可用于在没有实验室设备和专业人员的情况下进行快速、准确和可靠的病原体检测。本文将介绍该方法的研发过程、优点和应用前景。
材料与方法
制备细粒棘球蚴抗原
首先，从猪肉中提取细粒棘球蚴抗原。首先将猪肉切成小块，并在盐水中浸泡24小时，然后用蒸馏水冲洗干净。接下来将其切成小块，加入N-羟基丁二酸和消化液，放入37°C恒温培养箱中消化8小时。消化结束后，将样本离心以去除沉淀。提取上清液并用离心机离心。最后将上清液冷冻干燥，制成抗原粉末备用。
制备胶体金
制备胶体金的方法是用沉淀法制备。分别取1ml1%HAuCl4和20ml硼酸缓冲液烧开，并在不断搅拌的同时加入1ml的10%纳豆酸钠溶液，然后两者混合，继续加热搅拌5-10分钟。然后让其在室温下自然降温到室温后，加入3µl左右的10%硼酸溶液，充分混合并放置至少2小时。
制备抗体
在制备抗体之前，需要将细粒棘球蚴抗原与免疫动物的完整佐剂混合。将免疫原溶液固定在板上，然后在37°C下孵育3-4小时以制备免疫过程的完整佐剂。
然后将兔子分别注射细粒棘球蚴抗原和免疫动物的完整佐剂，进行免疫。免疫后，离心血液并收集血清，将血清与胶体金混合以制备抗体。
制备测试纸条
将Nitrocellulose膜（NC膜）剪成适当大小的条状，使用胶体金和抗体对其进行定向。在测试纸条底部的测试线和负对照线位置处，分别固定细粒棘球蚴抗原和抗细粒棘球蚴抗体，用于检测细粒棘球蚴感染的阳性反应和阴性对照反应。在NC膜尖端的发条位置固定蓝色甲氧基硅烷，用于控制测试纸条的流动速度。
检测方法
将需要检测的样品放入提取样品的样品架中，然后将测试纸条插入样品中10-15秒。然后将测试纸条放在平坦的表面上，等待5-10分钟进行读取。
结果及分析
测试纸条顶部的提示线看起来相同，底部的测试线和负对照线分别呈现出紫色和红色。这表明我们开发的测试纸条可用于检测细粒棘球蚴病的存在。
讨论
在本研究中，我们成功地制备了一种基于胶体金免疫层析技术的快速检测试纸条，用于检测细粒棘球蚴感染。该方法使用简便、操作简单、快速、低成本，可以在20分钟内完成检测。研究结果表明，该方法具有高度灵敏度、特异性和准确性