【精选】微生物的纯培养及显微技术.ppt

Chapter2微生物的纯培养及显微技术一、前言培养基二、微生物操作基本技术——无菌技术●消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。即仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的生物基本无害的措施用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant）●抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。●防腐(antisepsis)：利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖而对被消毒的物体基本无害的措施。如低温、缺氧、干燥、高酸、高渗或防腐剂。细菌一般不死亡。●无菌(asepsis)：不存在活菌。（1）常用物理消毒灭菌方法●热力灭菌法；●辐射杀菌法；●滤过除菌法；●超声波杀菌法。巴氏消毒的方法有几种？●间歇蒸汽消毒法：80-100℃15-60min37℃过夜循环三次。主要适用于不耐热培养基灭菌。Ⅱ）加压下：●连续加压灭菌：135-140℃下处理5-15s主要适用于大规模的发酵工厂培养基灭菌；●常规加压灭菌：121℃（压力：1kg/cm2或15磅/英寸）15~20min是一种最为广泛的灭菌方法。▲注意灭菌物体含菌量的影响含菌量越高灭菌时间越长。天然原料＞化学试剂▲空气的排除程度必须尽量驱尽锅内空气。是依靠温度而不是压力来达到灭菌的目的。15磅/英寸：纯蒸汽121℃；排除1/2空气：112℃；不排除空气：100℃。灭菌锅▲灭菌对象体积；50ml(12min)2000ml(30min)▲灭菌对象pH值：pH＜6.0最易死亡；而pH6.0~8.0时微生物最不易死亡。▲加热与散热的速度。B、辐射杀菌法；●紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其主要作用于DNA使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体导致细菌变异和死亡。●电离辐射：高速电子、X射线、γ射线洁净工作台●微波：波长1mm~1m超声仪（2）化学消毒剂：●消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。●消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、饮水、厕所、空气、手。3）接种操作●用接种环或接种针分离分离微生物或在无菌条件下把微生物由一个培养皿转接到另一个培养皿进行培养。三、微生物的分离和纯培养一）优势微生物分离纯培养灭菌液体石蜡何固体石蜡的混合物2、用液体培养基分离纯培养★适宜于不能在固体培养基上生长的微生物如一些细胞大的细菌、原生动物和藻类；★最后一个稀释度95%表现为不生长。二）劣势微生物分离纯培养1、单细胞分离★必须借助于低倍显微镜（较大的微生物）或显微操作仪（较小的微生物）；★对操作技术要求高多限于高度专业化的科学研究。2、选择培养分离★富集培养是分离微生物最强有力的手段之一。它可以用来分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物。三）二元培养物分离四、微生物的保藏技术4）保藏方法（1）传代培养保藏●类型：琼脂斜面、半固体琼脂柱及液体培养基●注意：A在规定时间内接种（一般1个月）B降低培养物的代谢或防止培养物干燥可延长传代保藏的时间。●优点：使用方便。●缺点：★工作繁琐；★容易污染；★易导致菌种的衰退。（2）冷冻保藏●原理：将微生物处于冷冻状态使其代谢作用停止以达到保藏的目的（降低温度）。●方法：★液氮（-196℃）；★-70℃低温冰箱；★-20℃普通冰箱（温度越低越好）●注意：尽量减小冰晶对细胞（主要是细胞膜）的损伤。★速冻；★快速升温；★加保护剂如甘油（可加到15-50%）二甲亚砜。液氮罐（3）干燥保藏法●原理：干燥使其代谢停止（减少水分）。●方法：★沙土管保存：适用于产孢子的微生物如芽孢杆菌、放线菌等。特点：简便易行并可以将微生物