【精选】实验四酸性磷酸酶Km及Vmax值测定.ppt

酸性磷酸酶Km及Vmax值测定清洗试管24支酸性磷酸酶：催化磷酸单酯的水解反应存在于人的肝脏前列腺等处植物中以发芽的种子中含量最为丰富。是生物体中重要的一种酶类为某些疾病的检测指标。酶液磷酸苯二钠苯酚＋磷酸氢二钠folin-酚测定酚的浓度计算出反应速度（用产物生成量/min来表示）根据双倒数法计算出Km及Vmax三、实验步骤：1、豆芽中的酸性磷酸酶的粗提取2、制作酶反应时间与产物生成量的关系曲线3、制作酚标准曲线4、[S]与V0关系实验5、双倒数作图法计算Vmax和Kmbuffer1、磷酸酶原液的制备：称取5g绿豆芽茎（去头去根）加入pH5.6的HAC缓冲液2ml研磨成浆并静置30分钟。纱布过滤取1.8ml滤液以6000rpm离心20min取上清。上清液用pH5.6的HAC缓冲液稀释30倍用于实验。2、制作酶反应时间与产物生成量的关系曲线（目的：选取合适的反应时间）加液程序表管号1234560磷酸苯二钠0.50.50.50.50.50.50.5酶液0.50.50.50.50.50.5精确反应时间3510152025碳酸钠溶液2222222酶液－－－－－－0.5Folin－酚溶液0.50.50.50.50.50.50.5Folin－酚溶液已稀释好！注：进行酶促反应时注意预热使所有的反应在同等条件下开始实验中需注意事项：酶反应作用时间精确控制Tubenumber