【精选】碱性磷酸酶km值测定.ppt

酶促反应动力学研究方法介绍实验目的学习环境因素对酶促反应速度的影响；学习米氏方程及Km值得测定；测量碱性磷酸酶km值；实验原理E的反应速度受到环境因素的影响这些因素包括底物浓度、E浓度、PH、温度、激活剂、抑止剂等（一）米－曼氏方程式米－曼氏方程式推导基于两个假设：(1)E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应而ES分解为E及P的反应为慢反应反应速度取决于慢反应即V＝k3[ES]。(2)S的总浓度远远大于E的总浓度因此在反应的初始阶段S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。推导过程当底物浓度很高将酶的活性中心全部饱和时即[Et]＝[ES]反应达最大速度Vmax＝K3[ES]＝K3[Et](5)当反应速度为最大反应速度一半时（二）Km与Vmax的意义Vmax定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速度与酶浓度成正比。定义—当酶被底物充分饱和时单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。意义—可用来比较每单位酶的催化能力。（三）Ｋm值与Ｖmax值的测定Hanes作图法酶浓度对反应速度的影响双重影响温度升高酶促反应速度升高；由于酶的本质是蛋白质温度升高可引起酶的变性从而反应速度降低。pH对反应速度的影响碱性磷酸酶km值的测定1．酚试剂2．2.5mmol／L磷酸苯二钠基质液3．碱性缓冲液(pH-10.0)4．碱性磷酸酶液操作实验数据及结果Km值的定义和意义是什么？米氏方程度表达式是什么如何求出Vmax和Km？