【精选】碱性磷酸酶Km值的测定.ppt
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【精选】碱性磷酸酶km值测定.ppt
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酶促反应动力学研究方法介绍实验目的学习环境因素对酶促反应速度的影响;学习米氏方程及Km值得测定;测量碱性磷酸酶km值;实验原理E的反应速度受到环境因素的影响,这些因素包括底物浓度、E浓度、PH、温度、激活剂、抑止剂等(一)米-曼氏方程式米-曼氏方程式推导基于两个假设:(1)E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应,而ES分解为E及P的反应为慢反应,反应速度取决于慢反应即V=k3[ES]。(2)S的总浓度远远大于E的总浓度,因此在反应的初始阶段,S的浓度可认为不变即[S]=[St]。推导过程当底物浓度很高,
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碱性磷酸酶Km值的测定【实验目的】【实验原理】Vmax•[S]V=Km+[S]其中Km为米氏常数,Vmax为最大反应速度,当V=Vmax/2时,则Km=[s]。Km是酶的特征常数,测定Km是研究酶的一种方法将米氏方程变形为双倒数方程,以l/v-1/[s]作图,将各点连线,在横轴截距为-/km,据此可算出Km值。1/V=Km/Vmax•[S]+1/Vmax本实验以碱性磷酸酶为例,用磷酸苯二钠为其底物,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色的深浅可测出酶