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碱性磷酸酶Km值的测定【实验目的】【实验原理】Vmax•[S]V=Km+[S]其中Km为米氏常数Vmax为最大反应速度当V=Vmax/2时则Km=[s]。Km是酶的特征常数测定Km是研究酶的一种方法将米氏方程变形为双倒数方程以l/v-1/[s]作图将各点连线在横轴截距为-/km据此可算出Km值。1/V=Km/Vmax•[S]+1/Vmax本实验以碱性磷酸酶为例用磷酸苯二钠为其底物生成酚和磷酸酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物根据红色的深浅可测出酶活力高低。其反应式如下:磷酸苯二钠+H2OAKPOH-苯酚苯酚+4-氨基安替比林K3Fe(CN)6醌衍生物(红色)管号酶液碱性溶液结果记录2、作图[S]比较两个值的大小分析实验误差产生的原因比较两种Km测定方法各自的优缺点