靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107827991A(43)申请公布日2018.03.23(21)申请号201711157376.3A61P35/02(2006.01)(22)申请日2017.11.20(71)申请人英普乐孚生物技术（上海）有限公司地址201306上海市浦东新区南汇新城环湖西二路888号C楼(72)发明人史燕东武宁(74)专利代理机构上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙)31251代理人刘红梅(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K35/17(2015.01)权利要求书1页说明书7页序列表7页附图2页(54)发明名称靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用(57)摘要本发明公开了一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用，用于制备嵌合抗原受体T细胞的嵌合抗原受体包含顺序串联的白介素2信号肽，抗CD19单链抗体，CD8蛋白分子的绞链区，跨膜区，胞内信号结构域及CD3ζ蛋白分子的胞内信号传导结构域；其氨基酸序列如SEQIDNO:9所示。该嵌合抗原受体T细胞应用于制备治疗血液恶性肿瘤的药物或制剂；其中，血液恶性肿瘤包括CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病，弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。CN107827991ACN107827991A权利要求书1/1页1.一种靶向CD19的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体包含顺序串联的白介素2信号肽，抗CD19单链抗体，CD8蛋白分子的绞链区，跨膜区，胞内信号结构域和CD3ζ蛋白分子的胞内信号传导结构域；其氨基酸序列如SEQIDNO:9所示。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述抗CD19单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，轻重链之间的连接区的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；所述嵌合抗原受体在其N-端以白介素2的信号肽跟抗CD19单链抗体的重链可变区连接，白介素2信号肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述CD8蛋白分子铰链区的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示。4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述胞内信号结构域与跨膜区来自同一信号蛋白分子，所述的信号蛋白分子选自CD27、CD28、人肿瘤坏死因子受体9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3或者与CD83特异性结合的配体。5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述嵌合抗原受体的跨膜区跟胞内信号结构域选自人肿瘤坏死因子受体9；该人肿瘤坏死因子受体9蛋白分子的跨膜区氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；该人肿瘤坏死因子受体9蛋白分子的胞内信号传导结构域氨基酸序列如SEQIDNO:7所示。6.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于：所述CD3ζ蛋白分子胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。7.核酸分子，其编码权利要求1-6任一项所述的嵌合抗原受体，且其核苷酸序列如SEQIDNO:10所示。8.载体，其包括权利要求7所述的核酸分子；所述载体是利用所述核酸分子对慢病毒载体pRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE中的GFP基因进行取代，并且以人延长因子1α基因的启动子取代其中的PGK启动子；其核苷酸如SEQIDNO:11所示。9.T细胞，其表达权利要求1至6任一项所述的嵌合抗原受体。10.如权利要求9所述的T细胞应用于制备治疗血液恶性肿瘤的药物或制剂；其中，所述的血液恶性肿瘤包括CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病，弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。2CN107827991A说明书1/7页靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用技术领域[0001]本发明属于免疫学和分子生物学技术领域，具体涉及一种靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及其应用。背景技术[0002]传统的放、化疗、手术、造血干细胞移植等治疗方法延长了部分血液系统恶性肿瘤患者的生存时间，但是复发、难治甚至耐药现象，仍是目前面临的巨大挑战。[0003]近年来，细胞免疫治疗因在肿瘤的肿瘤中取得了突破性进展，成为血液系统等多种肿瘤治疗的重要手段，被Science杂志列为2013年十大科学突破的首位。其中嵌合抗原受体T细胞免疫治疗进展尤为突出。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗技术是在体外通过基因工程技术修饰患者自体或异体T细胞成为表达嵌合抗原受体的嵌合抗原受体T细胞。嵌合抗原受体分子中包