靶向CD19的嵌合抗原受体、制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113735978A(43)申请公布日2021.12.03(21)申请号202110437265.8A61K35/17(2015.01)(22)申请日2021.04.22A61P35/00(2006.01)A61P35/02(2006.01)(71)申请人河北森朗生物科技有限公司A61P37/02(2006.01)地址050000河北省石家庄市高新区黄河A61P29/00(2006.01)大道136号1号楼512、513室A61P31/00(2006.01)(72)发明人李建强刘莹王琳(74)专利代理机构北京预立生科知识产权代理有限公司11736代理人朱萍孟祥斌(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/00(2006.01)权利要求书3页说明书9页序列表15页附图3页(54)发明名称靶向CD19的嵌合抗原受体、制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了靶向CD19的嵌合抗原受体、制备方法及其应用。本发明的嵌合抗原受体含有针对CD19的全人源的单链抗体。相比目前临床使用的利用针对CD19的鼠源单链抗体构建而成的CAR‑T细胞，本发明的CAR‑T细胞可明显降低免疫原性，可用于复发性CD19+白血病的治疗。CN113735978ACN113735978A权利要求书1/3页1.一种靶向CD19的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体顺次包括以下组件：胞外抗原结合结构域、间隔结构域、跨膜结构域、共刺激信号转导结构域、初级信号传导结构域；优选地，所述嵌合抗原受体顺次包括以下组件：胞外抗原结合结构域、间隔结构域、跨膜结构域、共刺激信号转导结构域、初级信号传导结构域、自裂解肽、细胞表面标志物；优选地，胞外抗原结合结构域为特异性结合CD19的scFv；所述scFv的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；优选地，间隔结构域是IgG4铰链区；优选地，所述IgG4铰链区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；优选地，所述跨膜结构域是CD28的跨膜区；优选地，所述CD28的跨膜区的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；优选地，所述共刺激信号传导结构域是4‑1BB的胞内信号传导结构域；优选地，所述4‑1BB的胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；优选地，所述初级信号传导结构域是CD3ζ的胞内信号传导结构域；优选地，所述CD3ζ的胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的序列；优选地，所述自裂解肽是T2A；优选地，T2A的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示；优选地，细胞表面标志物是tEGFR；优选地，tEGFR的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示；优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。2.一种核酸，所述核酸编码权利要求1的嵌合抗原受体；优选地，所述核酸还包含启动子、和/或位于启动子之后的酶切位点、和/或位于酶切位点之后的kozak序列；优选地，启动子位于所述核酸的N端，所述启动子是延长因子1α的启动子；优选地，所述启动子序列如SEQIDNO.9所示；优选地，所述酶切位点是PacI的识别位点；优选地，所述酶切位点的序列如SEQIDNo.10中第1‑8位所示；优选地，所述kozak序列如SEQIDNO.10中第9‑14位所示；优选地，所述核酸中信号肽的编码序列如SEQIDNO.10中第15‑78位所示；优选地，所述核酸中scFv的编码序列如SEQIDNO.10中第79‑822位所示；优选地，所述核酸中间隔结构域的编码序列如SEQIDNO.10中第823‑846位所示；优选地，所述核酸中跨膜结构域的编码序列如SEQIDNO.10中第847‑939位所示；优选地，所述核酸中共刺激信号传导结构域的编码序列如SEQIDNO.10中第940‑1068位所示；优选地，所述核酸中初级信号传导结构域的编码序列如SEQIDNO.10中第1069‑1404位所示；优选地，所述核酸中嵌合抗原受体的编码序列如SEQIDNO.10中第15‑2585位所示；优选地，所述核酸中T2A的编码序列如SEQIDNO.10中第1405‑1476位所示；优选地，所述核酸中tEGFR的编码序列如SEQIDNO.10中第1477‑2550位所示；优选地，所述核酸包括SEQIDNO.10所示的核苷酸序列。3.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求2所述的核酸；优选地，所述载体序列2CN113735978A权利要求书2/3页如SEQIDNO.13所示。4.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物包含权利要求2所述的核酸或权利要求3所述的载