靶向CD19的嵌合抗原受体及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107446051A(43)申请公布日2017.12.08(21)申请号201610377871.4A61P35/00(2006.01)(22)申请日2016.05.31(71)申请人上海恒润达生生物科技有限公司地址201210上海市浦东新区张江路1238弄1号楼8楼(72)发明人李启靖金涛何凤史子啸(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人韦东(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K35/17(2015.01)权利要求书2页说明书12页序列表9页附图2页(54)发明名称靶向CD19的嵌合抗原受体及其用途(57)摘要本发明涉及靶向CD19的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明提供一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：(1)含有依次连接的CD8抗原的前导肽、抗CD19单链抗体、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区、人CD28胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白；和(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白。本发明还提供所述融合蛋白的编码序列、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。CN107446051ACN107446051A权利要求书1/2页1.一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：(1)含有依次连接的CD8抗原的前导肽、抗CD19单链抗体、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区、人CD28胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白；和(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；优选地，所述抗CD19单链抗体为抗CD19单克隆抗体FMC63。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一个或多个特征：所述CD8抗原前导肽的氨基酸序列如SEQIDNO:1第1-21位氨基酸所示；所述抗CD19单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1第22-128位氨基酸所示；所述抗CD19单链抗体的重链可变区的氨基酸序列可如SEQIDNO:1第144-263位氨基酸所示；所述人CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQIDNO:3第1-47位氨基酸所示；所述人CD28跨膜区的氨基酸序列如SEQIDNO:3第48-74位氨基酸所示；所述人CD28胞内区的氨基酸序列如SEQIDNO:3第75-115位氨基酸所示；和所述人CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQIDNO:3第116-226位氨基酸所示。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列由SEQIDNO:1与SEQIDNO:3依次串联形成。4.一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：(1)编码权利要求1－3中任一项所述融合蛋白的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列；优选地，所述多核苷酸序列含有SEQIDNO:2所示的核苷酸序列和SEQIDNO:4所示的核苷酸序列，或由SEQIDNO:2和4所示的核苷酸序列依此串联而成。5.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸序列；优选地，所述核酸构建物为载体；更优选地，所述核酸构建物为逆转录病毒载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，以及权利要求4所述的多核苷酸序列。6.一种逆转录病毒，所述逆转录病毒含有权利要求5所述的核酸构建物，优选含有所述载体，更优选含有所述逆转录病毒载体。7.一种离体活化T细胞的方法，所述方法包括使用权利要求6所述的逆转录病毒感染所述T细胞的步骤。8.一种基因修饰的T细胞或含该基因修饰的T细胞的药物组合物，其特征在于，所述细胞含有本文权利要求4所述的多核苷酸序列，或含有权利要求5所述的逆转录病毒载体，或感染了权利要求6所述的逆转录病毒，或采用权利要求7所述的方法制备得到。9.权利要求1－3中任一项所述的融合蛋白、权利要求4所述的多核苷酸序列、权利要求5所述的载体或权利要求6所述的逆转录病毒在制备活化的T细胞中的应用。10.权利要求1－3中任一项所述的融合蛋白、权利要求4所述的多核苷酸序列、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的逆转录病、或权利要求8所述的基因修饰的T细胞在制备2CN107446051A权利要求书2/2页治疗CD19介导的疾病的药物中的用途；优选地，所述CD19介导的疾病包括白血病和淋巴瘤；更优选地，所述CD19介导的疾病包括B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、多毛细胞白血病、和急性髓性白血病。3CN107446051A说明书1/12页靶向C