一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108913604A(43)申请公布日2018.11.30(21)申请号201810683417.0(22)申请日2018.06.28(71)申请人贵州医科大学地址550025贵州省贵阳市花溪区贵安新区大学城贵州医科大学550025申请人贵州乐康能源科技发展有限公司(72)发明人康颖倩罗鹏(74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所52100代理人商小川(51)Int.Cl.C12N1/02(2006.01)C12Q1/04(2006.01)权利要求书2页说明书17页附图2页(54)发明名称一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法(57)摘要本发明公开一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：包含以下步骤：第一、菌种库中相关水解白酒丢糟可能水解白酒丢糟的有效真菌、从白酒丢糟堆放环境中直接分离培养真菌；第二、将筛选出来的真菌以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，依次通过羧甲基纤维素钠—刚果红培养基、PDA—苯胺蓝培养基、木聚糖—刚果红培养基进行初步筛选；第三、将菌株在以白酒丢糟为唯一营养物质的丢糟液中培养，判断菌株对丢糟水解能力；第四、将复合菌组在白酒丢糟液中进行酶活力测试，筛选具有协同作用、酶活力高的菌组即为高效复合水解菌组；第五、将高效复合菌组与公开发表过的具有高效水解纤维素的突变菌株的酶活力以及水解生物质的能力进行比较。CN108913604ACN108913604A权利要求书1/2页1.一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：包含以下步骤：第一、从荷兰WesterdijkFungalBiodiversityInstitute菌种库中相关水解白酒丢糟所需要的关键酶信息来筛选可能水解白酒丢糟的有效真菌、从白酒丢糟堆放环境中直接分离培养出可在极酸及营养成分贫乏条件下生长的真菌；第二、将筛选出来的真菌以白酒丢糟中难以水解的单一聚合物为唯一碳源，依次通过羧甲基纤维素钠—刚果红培养基、PDA—苯胺蓝培养基、木聚糖—刚果红培养基进行初步筛选；第三、将第二步中直径与水解、显色圈比值较大的菌株，在以白酒丢糟为唯一营养物质的丢糟液中培养，测试酶活力，判断菌株对丢糟水解能力大小，作为进一步筛选；第四、通过将酶活值高的菌株组成复合菌组，将复合菌组在白酒丢糟液中进行酶活力测试，筛选具有协同作用、酶活力高的菌组即为高效复合水解菌组，并利用产酶优化培养基优化高效复合菌组产酶能力；第五、将高效复合菌组与公开发表过的具有高效水解纤维素的突变菌株的酶活力以及水解生物质的能力进行比较。2.根据权利要求1所述的一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：所述的高效水解菌株为CBS113.65Oidiodendronechinulatum、CBS246.84Phanerochaetechrysosporium、CBS383.78Trichodermareesei、CBS554.65Aspergillusniger、CBS110.42Aspergillusniger和GYM-37Bjerkanderaadusta中的一种或一种以上组合。3.根据权利要求1所述的一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：优选的，高效水解菌株为CBS383.78+CBS554.65和CBS383.78+CBS554.65+GYM-37两个复合菌组。4.根据权利要求1所述的一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：所述的白酒丢糟堆放环境中直接分离培养包含：5.根据权利要求1所述的一种白酒丢糟的高效水解菌株的筛选方法，其特征在于：所述的从Westerdijk共筛选出：CBSNo.FungiCBS106.13ChrysosporiumpannorumCBS113.65Oidiodendronechinulatum2CN108913604A权利要求书2/2页CBS116.64ThermomycesverrucosusCBS138.65PenicilliumsimplicissimumCBS246.84PhanerochaetechrysosporiumCBS481.73SporotrichumpulverulentumCBS523.63DoratomycespurpureofuscusCBS613.91PleurotuseryngiiCBS882.68DoratomycesnanusCBS878.68StachybotryscylindrosporaCBS383.78TrichodermareeseiCBS392.92TrichodermareeseiCBS439.92TrichodermareeseiCBS101526TrichodermavirideCBS397.92Tri