高纯度的甜菊醇糖苷.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110358795A(43)申请公布日2019.10.22(21)申请号201910173608.7C·哈林P·罗布R·泰阿莱(22)申请日2013.03.12(74)专利代理机构中国国际贸易促进委员会专(30)优先权数据利商标事务所1103861/649,9782012.05.22US代理人张小勇(62)分案原申请数据(51)Int.Cl.201380002119.62013.03.12C12P19/18(2006.01)C12P19/56(2006.01)(71)申请人谱赛科有限责任公司地址马来西亚森美兰州申请人可口可乐公司阿韦季克·马尔科相因德拉·普拉卡什(72)发明人阿韦季克·马尔科相因德拉·普拉卡什文卡塔·赛·普拉卡什·查图维杜拉权利要求书1页说明书31页序列表2页附图10页(54)发明名称高纯度的甜菊醇糖苷(57)摘要描述了制备高度纯化的甜菊醇糖苷，特别地莱鲍迪苷A、D和X的方法。所述方法包括表达来自甜叶菊的UDP-葡萄糖基转移酶，所述酶能够将某些甜菊醇糖苷转化成莱鲍迪苷A、D和X。高度纯化的莱鲍迪苷A、D和X在可食用和可咀嚼组合物例如任何饮料、糕饼、焙烤食品、饼干和口香糖中可用作无热量甜味剂。CN110358795ACN110358795A权利要求书1/1页1.一种用于产生高度纯化的靶甜菊醇糖苷的方法，包括步骤：a.提供包含底物甜菊醇糖苷的起始组合物；b.提供UDP-葡萄糖基转移酶；c.任选地提供能够进行UDP-葡萄糖过量产生和再循环的生物催化剂以及用于所述再循环的底物；d.将UDP-葡萄糖基转移酶与包含起始组合物的介质接触，以产生包含靶甜菊醇糖苷的组合物，所述靶甜菊醇糖苷与底物甜菊醇糖苷相比，包含一个或多个额外的葡萄糖单位；和e.将靶甜菊醇糖苷与介质分离，以提供高度纯化的靶甜菊醇糖苷组合物。2.权利要求1的方法，其中所述底物甜菊醇糖苷选自甜菊单苷、甜菊双苷、甜叶悬钩子苷、杜尔可苷B、杜尔可苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷G、甜菊苷、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷F、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷H、莱鲍迪苷L、莱鲍迪苷K、莱鲍迪苷J、莱鲍迪苷X、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷N、莱鲍迪苷O、合成的甜菊醇糖苷及其组合。3.权利要求1的方法，其中UDP-葡萄糖基转移酶是能够催化甜叶悬钩子苷至甜菊苷、甜菊苷至rebA、rebA至rebD和/或rebD至rebX的葡萄糖基化的UDP-葡萄糖基转移酶。4.权利要求1的方法，其中当底物甜菊醇糖苷是甜叶悬钩子苷并且靶甜菊醇糖苷是甜菊苷时，UDP-葡萄糖基转移酶是UGT91D2，当底物甜菊醇糖苷是甜菊苷并且靶甜菊醇糖苷是rebA时，UDP-葡萄糖基转移酶是UGT76G1，当底物甜菊醇糖苷是rebA并且靶甜菊醇糖苷是rebD时，UDP-葡萄糖基转移酶是UGT91D2，或当底物甜菊醇糖苷是rebD并且靶甜菊醇糖苷是rebX时，UDP-葡萄糖基转移酶是UGT76G1。5.权利要求1的方法，其中在微生物中表达UDP-葡萄糖基转移酶，所述微生物选自大肠杆菌、酵母菌属的种、曲霉菌属的种、毕赤酵母属的种或适合用于容纳UDP-葡萄糖基转移酶基因及其随后的表达的另一种适当的微生物。6.权利要求1的方法，其中在步骤(c)中，在微生物中表达生物催化剂，所述微生物选自大肠杆菌、酵母菌属的种、曲霉菌属的种、毕赤酵母属的种或适合于UDP-葡萄糖再循环酶基因及它们的随后表达和起作用的另一种微生物。7.权利要求1的方法，其中将步骤(b)中的UDP-葡萄糖基转移酶和任选地步骤(c)中的生物催化剂包含在相同的微生物细胞中。8.权利要求1的方法，其中将步骤(b)中的UDP-葡萄糖基转移酶和/或步骤(c)中的生物催化剂以游离或固定形式的粗制的、半纯化的和纯化的酶制剂、活微生物细胞、完整的微生物细胞、细胞裂解物和/或本领域已知的生物催化剂的任何其它形式使用。9.权利要求1的方法，其中靶甜菊醇糖苷选自甜菊苷、rebA、rebD、rebX及其混合物。10.权利要求1的方法，其中使用结晶、通过膜的分离、离心、提取、色谱分离或所述方法的组合来将靶甜菊醇糖苷与反应介质分离。2CN110358795A说明书1/31页高纯度的甜菊醇糖苷[0001]本申请是中国发明专利申请201380002119.6的分案申请。技术领域[0002]本发明涉及用于制备包含甜菊醇糖苷(steviolglycoside)的组合物，包括高度纯化的甜菊醇糖苷组合物的生物催化法。[0003]通过引用并入序列表[0004]将2013年3月12日创建的、具有5KB(千字节)的数据并且与本文同时提交的、标题为"PureCircle_22PCT_ST25.txt"的文本文件通过引用整体并入本申请。[000