用于检测叶酸基因多态性的探针、基因芯片及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110616259A(43)申请公布日2019.12.27(21)申请号201910823542.1(22)申请日2019.09.02(71)申请人珠海赛乐奇生物技术股份有限公司地址519085广东省珠海市唐家湾镇金峰西路24号6栋5层(72)发明人肖杰王丽玲余义文陈建奇宋家武(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人郑晨鸣(51)Int.Cl.C12Q1/6883(2018.01)C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/6837(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称用于检测叶酸基因多态性的探针、基因芯片及试剂盒(57)摘要本发明属于生物检测技术领域，公开了用于检测叶酸基因多态性的探针、基因芯片及试剂盒。所述探针包括MTHFR677-C探针、MTHFR677-T探针、MTHFR1298-A探针、MTHFR1298-C探针、MTRR66-A探针和MTRR66-G探针。所述基因芯片上含有所述探针。所述试剂盒包括所述探针和基因芯片。本发明通过特异性探针和引物的选择，结合基因芯片的方法，具有特异性好、准确性高和快速方便的优势；通过基因芯片的可见光光学放大，能达到较高的信号分辨率；同时实现了叶酸基因的一次性多位点测定，减少了检测时间和成本；检测结果可由拍照或肉眼直接读取，简单方便。CN110616259ACN110616259A权利要求书1/1页1.一种用于检测叶酸基因多态性的探针，其特征在于，所述探针的序列为：MTHFR677-C探针：AAAAAAAAAACGTGATGATGAAATCGGCTC；MTHFR677-T探针：AAAAAAAAAACGTGATGATGAAATCGACTC；MTHFR1298-A探针：AAAAAAAAAACAAAGACACTTTCTTCACTGGTC；MTHFR1298-C探针：AAAAAAAAAAAAGACACTTGCTTCACTGGT；MTRR66-A探针：AAAAAAAAAACAGCTTGCTCACATATTTCTTC；MTRR66-G探针：AAAAAAAAAACACAGCTTGCTTGCTCACACA。2.一种用于检测叶酸基因多态性的基因芯片，其特征在于，含有权利要求1所述的用于检测叶酸基因多态性的探针。3.一种权利要求2所述用于检测叶酸基因多态性的基因芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在衬底上镀膜，得到生物传感器；(2)在生物传感器上覆盖涂层，经6-肼基烟酸琥珀酰亚胺酯盐酸盐处理后，水洗；(3)将经修饰的探针点样在生物传感器上，制得基因芯片。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中采用醛基或氨基对探针的一端进行修饰。5.一种用于检测叶酸基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的基因芯片、PCR反应体系、杂交缓冲液、洗涤液、BW反应液和TMB显色液。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应体系包括以下组分：5×Buffer，dUTPmix，F-引物，R-引物，Hottaq，UNG酶和ddH2O。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述F-引物的序列为：MTHFR677-F：5'-TTGAGGCTGACCTGAAGCACTTGAAGGAG-3'；MTHFR1298-F：5'-CTTTGGGGAGCTGAAGGACTACTA-3'；MTRR66-FP：5'-CCTTGAAGTGATGAGGAGG-3'。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述R-引物的序列为：MTHFR677-R：5'-CCTGGATGGGAAAGATCCCG-3'；MTHFR1298-R：5'-CACTTTGTGACCATTCCGGTTT-3'；MTRR66-RP：5'-CCACTGTAACGGCTCTAACC-3'。9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述杂交缓冲液包括0.3mol/L柠檬酸三钠、3mol/L氯化钠、0.3mol/L十二烷基硫酸钠和TritonX–1000.1％水溶液。10.一种叶酸基因多态性的检测方法，其特征在于，采用权利要求5-9中任一项所述的试剂盒进行检测，包括以下步骤：(1)将待测物加入至PCR反应体系中进行扩增，得到PCR扩增产物；(2)在基因芯片上加入PCR扩增产物和杂交缓冲液，进行反应；(3)用0.01-0.1mol/L的NaOH溶液和0.1×SSC溶液对基因芯片进行洗涤，洗涤后风干；(4)取BW反应液于基因芯片上，在室温条件下反应；(5)加入TMB显色液进行显色，加入TMB显色液的前后均使用0.1×SSC溶液对基因芯片进行洗涤并风干，通过拍照或肉眼