一种快速检测NTRK基因融合试剂盒及其方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110144401A(43)申请公布日2019.08.20(21)申请号201910390114.4(22)申请日2019.05.10(71)申请人广州安必平医药科技股份有限公司地址510663广东省广州市高新技术产业开发区南翔三路11号自编7栋(72)发明人陈绍宇何瑰(74)专利代理机构广州胜沃园专利代理有限公司44416代理人张帅(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图3页(54)发明名称一种快速检测NTRK基因融合试剂盒及其方法(57)摘要本发明涉及NTRK基因融合快速检测方法和试剂盒，属于分子生物学检测领域。所述的NTRK基因融合快速检测试剂盒是通过将市场购买对应探针的BAC克隆使用phi29DNA聚合酶标记制备得到探针，缓冲液组分通过优化确定，所制备的试剂盒为可以实现2小时内快速杂交，并可实现NTRK基因重排的准确判读。本发明所述的检测试剂盒通过组分优化，检测试剂的商品化能够更好的辅助现有方法进行肿瘤的准确分层、精准诊断、治疗，具有较好的应用前景。CN110144401ACN110144401A权利要求书1/1页1.一种快速检测NTRK基因融合试剂盒，其包括NTRK1基因探针、NTRK2基因探针、NTRK3基因探针和缓冲液。2.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒，其特征在于，所述的基因探针制备方法包括购买BAC克隆→标记、测试→确认探针克隆组，具体包括如下步骤：市场购买对应探针的BAC克隆，使用phi29DNA聚合酶标记，标记后将探针进行定量后包装待用。所述的phi29DNA聚合酶标记过程包括：以BAC克隆为基础模板，使用phi29DNA聚合酶，利用短随机六聚体引物在30℃下扩增，标记时间为12小时。3.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒，其特征在于，NTRK1基因探针为断裂探针，其包括GSPNTRK1-G和GSPNTRK1-R，其中GSPNTRK1-G包括CTD-2250P13chr1:156,729,698-156,838,455，CTD-2193L24chr1:156,623,234-156,793,355，CTD-2167D21chr1:156,521,218-156,623,187三个片段；GSPNTRK1-R包括CTD-2260D6chr1:156,899,249-157,030,882和CTD-3112E24chr1:157,028,427-157,158,598两个片段；NTRK2基因探针为断裂探针，其包括GSPNTRK2-R和GSPNTRK2-G，所述的GSPNTRK2-R包括CTD-2016D19chr9:84,588,703-84,695,686，CTD-2509D1chr9:84,401,922-84,612,318和CTD-2220B15chr9:84,264,299-84,394,202三个片段；GSPNTRK2-G包括CTD-2277N18chr9:84,949,219-85,052,294，CTD-2313B20chr9:85,052,301-85,167,191和CTD-3171G19chr9:85,159,856-85,308,599三个片段。NTRK3基因探针为断裂探针，其包括GSPNTRK3-R和GSPNTRK3-R，所述的GSPNTRK3-R包括CTD-3108M7chr15:87,788,057-87,900,751，CTD-2526N1chr15:87,651,627-87,863,843，CTD-2600M21chr15:87,443,620-87,633,446三个片段；GSPNTRK3-G包括CTD-2215J16chr15:88,135,580-88,287,232，CTD-2349O8chr15:88,254,463-88,390,482和CTD-2303N16chr15:88,456,004-88,567,698三个片段。4.根据权利要求1所述的一种快速检测NTRK基因融合试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中缓冲液组分为甲酰胺添加量在15％～50％、硫酸葡聚糖0.2～0.25g/700μL、二甲基亚砜20～30μL。5.一种将权利要求1-4任一所述的试剂盒用于NTRK基因检测的杂交方法，其特征在于，杂交过程中变性温度为85℃，杂交温度为45℃，杂交时间为2小时。6.根据权利要求5所述的一种用于NTRK基因检测的杂交方法，其特征在于，所述的基因检测的杂交方法中红色探针用量0.6～0.8μL，绿色探针用量0.8～1.0μL。2CN110144401A说明书1/11页