一种果胶酶固定化的载体及固定化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102010858A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102010858A(43)申请公布日2011.04.13(21)申请号201010033791.X(22)申请日2010.01.14(71)申请人北京联合大学地址100101北京市朝阳区北四环东路97号(72)发明人李鸿玉厉重先李祖明(51)Int.Cl.C12N11/00(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图2页(54)发明名称一种果胶酶固定化的载体及固定化方法(57)摘要本发明公开了一种果胶酶固定化的载体及固定化方法，属于酶工程领域。本发明果胶酶固定化载体由海藻酸钠、Fe3O4、戊二醛组成。其制备方法包括：配制2％海藻酸钠水溶液，加入一定量Fe3O4磁粉，搅匀，用注射器注入到1％浓度CaCl2水溶液中，得到颗粒均匀、规整的小球，经水洗、干燥后，浸没于3％戊二醛溶液，30℃振荡2h，水洗，干燥，即可。将以载体、果胶酶液及一定pH的缓冲液构成的体系，于40℃下振荡一小时，蒸馏水洗涤，得固定化酶，于0-4℃冰箱保存。实验证明，本发明载体固定化果胶酶的酶活回收率达90％以上，重复使用5次后的酶活力保留达68.7％。本发明对于果胶酶在果品加工等领域具有广泛应用前景。CN10285ACCNN102010858102010861AA权利要求书1/1页1.一种果胶酶固定化的载体及固定化方法，载体包括以下彼此独立的各组分组成：海藻酸钠、Fe3O4磁粉、戊二醛水溶液。2.按照权利要求1所述的果胶酶固定化的载体，其特征在于，各组分的浓度分别为：海藻酸钠水溶液1％-5％，Fe3O4磁粉0.2％-0.8％，戊二醛1％-7％；3.按照权利要求2所述的果胶酶固定化的载体，其特征在于，各组分的浓度分别为：海藻酸钠水溶液2％，Fe3O4磁粉0.6％，戊二醛3％；4.权利要求1所述果胶酶固定化载体的制作方法，包括：(1)配制海藻酸钠水溶液，加入自制的Fe3O4磁粉，搅拌均匀，用注射器注入到CaCl2凝结液中，得到颗粒均匀、形状规整的磁性海藻酸钠复合小球，水洗至中性，丙酮洗涤，50℃真空干燥。(2)取干燥的磁性海藻酸钠复合小球加入戊二醛溶液，使之浸没，并于30℃振荡2h，用水和丙酮反复洗涤，50℃真空干燥，得到交联的磁性海藻酸钠复合小球载体。5.权利要求1所述的固定化方法，包括：将交联的磁性海藻酸钠复合小球载体、果胶酶溶液，及一定pH的缓冲溶液定容的固定体系，40℃下振荡40-60分钟，用少量蒸馏水洗涤后，置于0-4℃冰箱保存。6.权利要求5所述的固定化方法，固定体系中载体与酶的相对量，以每100ml溶液中载体2g，果胶酶15-20mg为宜；固定体系pH为3.0-3.5。2CCNN102010858102010861AA说明书1/9页一种果胶酶固定化的载体及固定化方法技术领域[0001]本发明涉及一种果胶酶固定化载体及其制备方法，本发明还涉及果胶酶固定化方法，属于酶工程领域。背景技术[0002]果胶酶是催化果胶质分解的多种酶的总称，它们被广泛应用于食品加工、酿酒、纺织等行业，已成为世界四大酶制剂之一。随着我国食品工业的迅速发展，对果胶酶的需求量日益增大，而目前果胶酶多为一次性使用。由于游离果胶酶对环境变化的耐受力极低，易变性失活，且不宜与底物和产物分离，很大程度上限制了它的大规模应用。[0003]酶固定化是酶工程的新技术。固定化酶具有重复利用其催化活性，降低成本，能实现连续自动化生产，提高产品质量等优点。目前关于固定化果胶酶的研究，虽然比游离果胶酶在耐pH值稳定性、热稳定性和贮存稳定性等方面有较大提高，但由于固定化载体强度等方面原因，仍存在酶活回收率低等不足，从而制约了固定化果胶酶在食品工业生产中的应用。因此，进一步寻求实用、有效的果胶酶固定化载体和固定化方法仍然是该领域的重要研究课题。发明内容[0004]本发明的目的之一是提供一种实用、有效的果胶酶固定化载体及其制备方法；[0005]本发明的目的之二是提供一种果胶酶固定化的方法；[0006]本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：[0007]1、一种果胶酶固定化的载体及其制备方法[0008](1)本发明果胶酶固定化载体的组成[0009]果胶酶固定化的载体由以下组分构成：海藻酸钠水溶液，Fe3O4磁粉、戊二醛水溶液。[0010]为了达到更好的效果，优选的各组分的浓度为：海藻酸钠水溶液1％-5％，Fe3O4磁粉0.2％-0.8％，戊二醛1％-7％；更优选的各组分的浓度为：海藻酸钠水溶液2％，Fe3O4磁粉0.6％，戊二醛3％。[0011]海藻酸钠是一种从海藻中提取的亲水性胶态多聚糖，它是由β-(1，4)D-甘露糖醛酸和α-(1，4)L-古罗糖醛酸组成的线性高分子化合物，其分子含有自由的羧基和羟基