一种酶固定化载体及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107177585A(43)申请公布日2017.09.19(21)申请号201710513613.9(22)申请日2017.06.29(71)申请人兰州理工大学地址730050甘肃省兰州市七里河区兰工坪路287号(72)发明人陈振斌王旭东刘冬蕾李轲张霞云李慧(74)专利代理机构北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司11385代理人董芙蓉(51)Int.Cl.C12N11/08(2006.01)C08F293/00(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种酶固定化载体及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种酶固定化载体及其制备方法，属于材料科学与工程领域，包括PDEA-b-HEMA-b-GMA，其中GMA占温敏性单体的摩尔百分比范围为12-92％，HEMA占温敏性单体的摩尔百分比范围为12-84％，其LCST为33-39℃，固定化PGA酶活力范围为660-1030U/g、对应的游离酶量范围903-1090U、酶活回收率大致范围为73-95％，重复使用10次后，其酶活保留率为79％。CN107177585ACN107177585A权利要求书1/1页1.一种酶固定化载体，其特征在于，载体结构为PDEA-b-HEMA-b-GMA的三嵌段共聚物，其中GMA占温敏性单体的摩尔百分比范围为12-92％，HEMA占温敏性单体的摩尔百分比范围为12-84％，其LCST为33-39℃，固定化PGA酶活力范围为660-1030U/g、对应游离酶负载量范围903-1090U、酶活回收率的范围为73-95％，重复使用10次后，其酶活保留率为79％。2.根据权利要求1所述的酶固定化载体，其特征在于，PDEA-b-HEMA-b-GMA中各结构单元比例为100:47:24，其LCST为36℃，固定化青霉素酰化酶对应游离酶量为910U、酶活力820U/g、酶活回收率90％。3.一种权利要求1所述酶固定化载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、温敏性三嵌段共聚物载体的制备1)大分子RAFT试剂PDEA的合成：以AIBN与CPDTC与DEA摩尔比为1:20:1000，DEA与ACE质量比为1.2700:0.0035，称取一定质量的DEA，DEA质量分数为50％，乙酸乙酯为溶剂，装入试管中，超声1-2分钟，放入磁子，密封，通氮气，65℃油浴磁力搅拌反应一定时间，然后将粗产品溶沉三次，乙酸乙酯为溶剂，正葵烷为沉淀剂，得到一定分子量的大分子RAFT试剂PDEA；2)不同单体比例的二嵌段共聚物PDEA-b-PHEMA或PDEA-b-PGMA的合成：以AIBN与大分子RAFT试剂PDEA与单体HEMA或GMA不同的摩尔比，各称取一定质量的单体，分别加入不同的试管中，单体和PDEA的总质量分数为5％，DMF为溶剂，超声1-2分钟，放入磁子，密封，通氮气，65℃油浴磁力搅拌反应不同时间，溶沉三次，DMF为溶剂，乙醚为沉淀剂，即得不同单体比例的二嵌段共聚物PDEA-b-PHEMA或PDEA-b-PGMA；3)不同单体比例的三嵌段共聚物PDEA-b-PHEMA-b-PGMA或PDEA-b-PGMA-b-PHEMA的合成：以AIBN与二嵌段共聚物PDEA-b-PHEMA或PDEA-b-PGMA与单体GMA或HEMA不同的摩尔比，各称取一定质量的单体，分别加入不同的试管中，单体和二嵌段共聚物的总质量分数为5％，DMF为溶剂，超声1-2分钟，放入磁子，密封，通氮气，65℃油浴磁力搅拌反应不同时间，溶沉三次，DMF为溶剂，乙醚为沉淀剂，即得不同单体比例的三嵌段共聚物PDEA-b-HEMA-b-GMA或PDEA-b-PGMA-b-PHEMA；步骤2、固定化PA称取0.1g上述合成的载体，加入到10-mL称量瓶中，再加入20％的5mL游离PA酶液，密封，超声1分钟，置于阴暗避光条件下固定化24小时；将游离PA残液抽出，固定化PA用磷酸盐缓冲液冲洗2至3次，直至用PDAB显色法测得前后两次吸光度小与0.005；放入40℃真空烘箱干燥48小时，再称重，得固定化PA。2CN107177585A说明书1/3页一种酶固定化载体及其制备方法技术领域[0001]本发明属于材料科学与工程领域，涉及一种酶固定化载体及其制备方法。背景技术[0002]固定化酶(Immobilizedenzyme)是20世纪60年代发展起来的一种新技术。所谓固定化酶，是指在一定的空间范围内起催化作用，并能反复和连续使用的酶。酶法生产6-氨基青霉素烷酸(6-Aminopenicillanicacid,6-APA)工艺的核心问题是高效固定化青霉素酰化酶(PenicillinGacylase,PGA)的制备技术，而载体材料的设计与