一种载体造粒技术制备固定化酶的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109234262A(43)申请公布日2019.01.18(21)申请号201811085236.4C12N11/04(2006.01)(22)申请日2018.09.17(71)申请人北京化工大学地址100029北京市朝阳区北三环东路15号(72)发明人邓利田娇娇徐军涛聂开立王芳(74)专利代理机构北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙)11617代理人栗华楠(51)Int.Cl.C12N11/14(2006.01)C12N11/12(2006.01)C12N11/10(2006.01)C12N11/08(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称一种载体造粒技术制备固定化酶的方法(57)摘要本发明属于固定化酶制备技术领域，具体涉及一种载体造粒技术制备固定化酶的新方法。本方法利用低廉易得的载体，将酶蛋白分子吸附于载体表面得到粉末状的固定化酶；在海藻酸钠溶液的作用下，经造粒技术使固定化酶实现由粉末到颗粒的转变；再经过钙化工艺使颗粒状固定化酶表面形成硬度较强的海藻酸钙薄膜结构，保证了固定化酶颗粒结构的硬度和机械强度。本发明制备的固定化酶具有更好的稳定性、刚性及溶剂耐受性，在正己烷，甲醇等溶剂存在的条件下，重复使用十几批以后仍保留着80％以上的酶活，并且颗粒形态较好，无明显松散现象。相比于商业化固定化酶具有原料成本低廉、方法操作简单、易于产业化等优点。CN109234262ACN109234262A权利要求书1/1页1.一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤；(1)酶与载体的吸附：将脂肪酶溶解在缓冲溶液中，按游离酶粉和载体的质量比为1：5～1：3加入粉末状载体，吸附固定0.5h～6h，离心晾干，得到粉末状固定化酶；(2)粉末状固定化酶的造粒：将步骤(1)得到的粉末状固定化酶加入海藻酸钠溶液，经造粒得到颗粒状的固定化酶；(3)颗粒状固定化酶的钙化：将步骤(2)得到的固定化酶颗粒加入到氯化钙溶液中，在摇床中反应10min～120min后取出晾干，得到钙化的固定化酶颗粒；(4)固定化酶颗粒的筛分；对步骤(3)得到的钙化固定化酶过筛网进行筛分，取合适孔径规格的固定化酶即为成品固定化酶。2.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述载体为天然纤维素类材料。3.如权利要求2所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述天然纤维素类材料为稻草、稻壳、秸秆、竹粉、芦苇或木屑。4.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述载体为无机固定化载体或有机固定化载体。5.如权利要求4所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述载体为硅藻土、活性炭、凝胶或树脂。6.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，步骤(1)吸附固定的温度为20℃～55℃；采用摇床吸附固定的摇床转速为150rpm～220rpm。7.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，步骤(2)所述造粒的方法为湿法造粒或挤出造粒。8.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，步骤(2)中海藻酸钠溶液浓度为0.5％～4％。9.如权利要求1所述的一种载体造粒技术制备固定化脂肪酶的方法，其特征在于，步骤(3)中氯化钙溶液浓度为0.1％～2％；钙化温度为20℃～55℃；摇床转速为150rpm～220rpm。2CN109234262A说明书1/9页一种载体造粒技术制备固定化酶的方法技术领域：[0001]本发明属于固定化酶制备技术领域，具体涉及一种载体造粒技术制备固定化酶的新方法。背景技术：[0002]酶催化反应条件温和，而且具有高度的特异性，副产物少，这使得它在生物技术领域非常的重要和受欢迎。市场上的商品化的酶主要是水解酶，如蛋白酶、淀粉酶、酰胺酶和脂肪酶。事实上，据报道三分之一的生物转化是由脂肪酶来完成的，基于脂肪酶的市场价值，它被誉为是在蛋白酶和糖酶之后的第三大酶组。脂肪酶作为添加剂应用于食品、制药、医疗检测、化妆品、皮革加工、乳制品、精细加工、洗涤剂、造纸和污水处理行业等等。不同来源的脂肪酶被广泛用于催化水解反应、醇解反应、酯化反应和转酯化反应当中。但是游离酶存在催化稳定性差、重复利用率低、强酸强碱及高温条件易失活等问题，因此固定化工艺成为了研究人员提高酶活性和稳定性的重要研究方向。[0003]载体与固定化方法的选择是固定化酶工艺的两个重要研究问题。载体材料性能与结构的选择，对固定化酶的性能影响巨大。目前公开的专利介绍以天然多孔材料、改性材料、磁性微球、各类凝胶、合成树脂等单一载体进行