SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102167746A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102167746A(43)申请公布日2011.08.31(21)申请号201010542698.1G01N33/569(2006.01)(22)申请日2010.11.11(71)申请人姜东成地址315000浙江省宁波市海曙区永丰西路98弄43号302(72)发明人姜东成刘洋洋(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204代理人柏尚春(51)Int.Cl.C07K16/44(2006.01)C12N5/0775(2010.01)C12N5/0789(2010.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用。该SPG-抗体多聚体由抗血型糖蛋白A单克隆抗体、SPG与目标抗原的抗体偶联而成。该多聚体一端通过抗血型糖蛋白A单克隆抗体与红细胞相偶联，另一端通过目标细胞表面抗原或其他抗原的抗体与目标抗原相偶联，之后静置通过红细胞沉淀来检测目标抗原，或通过密度梯度离心来去除血液中成熟的有核细胞与红细胞，保留所有的干细胞/祖细胞。本发明用来分离提取干/祖细胞是采用负选与密度梯度离心相结合的方法，收集的干/祖细胞表面没有任何标记，细胞活性好，方法简单实用，可工业化生产，易于推广，可广泛应用于实验室与临床细胞损伤性疾病的研究与治疗，前景广阔。CN102674ACCNN110216774602167750A权利要求书1/1页1.一种SPG-抗体多聚体，其特征在于：由抗血型糖蛋白A单克隆抗体、SPG与目标抗原的抗体偶联而成。2.根据权利要求1所述的SPG-抗体多聚体，其特征在于：所述的SPG与抗血型糖蛋白A单克隆抗体相偶联结合。3.根据权利要求1所述的SPG-抗体多聚体，其特征在于：所述的SPG分子量为22~65KD。4.一种制备权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的方法，其特征在于：将SPG以无菌磷酸盐缓冲液稀释至浓度为0.1mg/ml，抗血型糖蛋白A单克隆抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，目标抗原的抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，在37℃下混合稀释后3种溶液，反应30min～2h，得到SPG-抗体多聚体溶液，在2～8℃下保存；其中，目标抗原的抗体、链球菌G蛋白和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1~1：1：10。5.权利要求1所述的SPG-抗体多聚体在制备用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒中的应用。6.一种基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒，其特征在于：包括细胞稀释液、SPG-抗体多聚体溶液和细胞分离液；其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原的单克隆抗体，包括淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66a、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。7.权利要求5所述的基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒的使用方法，其特征在于：首先用细胞稀释液将骨髓/脐带血按1:1的比例进行稀释，然后加入SPG-抗体多聚体溶液，缓慢摇匀，静置30分钟，取上清液离心浓缩，将浓缩液加入到细胞分离液，离心30分钟，收取细胞层洗涤2-4次即可使用。8.权利要求1所述的SPG-抗体多聚体在制备用于检验血液中特异性抗原的指示剂中的应用。9.一种基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒，其特征在于：包括抗体稀释液和SPG-抗体多聚体溶液；其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原的抗体为抗肿瘤抗体、抗猪瘟病毒抗体或牛腹泻病毒抗体。10.权利要求9所述的基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒的使用方法，其特征在于：将SPG-抗体多聚体进行稀释，加入到待测液中，37℃下30min后形成肉眼或显微镜下可见的经典玫瑰花环状，即为阳性。2CCNN110216774602167750A说明书1/7页SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物医学技术应用领域，具体涉及一种SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用。SPG-抗体多聚体为抗血型糖蛋白A单克隆抗体-链球菌G蛋白-抗体多聚体的简称。链球菌G蛋白简称为SPG。背景技术[0002]干细胞（stemcell,SC）是一类具有